论文摘要
中国明对虾是我国重要的海产养殖品种，在沿海地区海产品养殖中占有重要的经济地位。然而，自上世纪90年代以来，对虾疾病频繁爆发，使海产养殖业遭受巨大损失。解决这一问题除环境因素外，提高对虾自身免疫力和抗病力是一个很重要的方面。因此只有了解了对虾的免疫机制才能为其疾病控制提供有效的方法。在无脊椎动物中，丝氨酸蛋白酶调控多种防御反应，包括血淋巴凝结、抗菌肽合成和在病原体表面形成黑化包囊。这些过程都需要血淋巴中的丝氨酸蛋白酶的参与，当受到病原体的感染，丝氨酸蛋白酶可以迅速激活免疫应答途径。本论文以中国明对虾丝氨酸蛋白酶这个与对虾先天免疫相关的基因为研究对象，应用一系列的生物化学和分子生物学技术，进行基因克隆、组织分布以及表达研究，试图从一定层面上了解对虾的免疫机制，为对虾疾病的防治提供理论依据。1首次克隆得到了中国明对虾丝氨酸蛋白酶全长基因。利用同源克隆的方法，从中国明对虾血细胞中克隆得到了中国明对虾丝氨酸蛋白酶全长cDNA，全长1065bp，开放阅读框（ORF）为1020bp，编码339个氨基酸，由信号肽、一个发夹结构域（Clip domain）和胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域（TrypSPc domain）构成。2应用RT-PCR，Northern Blot和原位杂交方法，对中国明对虾丝氨酸蛋白酶在中国明对虾中的表达和分布进行了研究。RT-PCR和Northern Blot结果显示，中国明对虾丝氨酸蛋白酶在对虾的血细胞和鳃中发生转录，而在其它组织中无表达，并且结果还显示，在细菌刺激的中国明对虾血细胞中和鳃中，丝氨酸蛋白酶基因表达下调。推测该基因可能与免疫防御有关。原位杂交结果显示，丝氨酸蛋白酶基因只在血细胞中表达，在中国明对虾鳃中的阳性信号也是源自血细胞。3中国明对虾丝氨酸蛋白酶原核表达研究。本文构建了中国明对虾丝氨酸蛋白酶表达载体sp-pET-30a（+），并在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中成功表达了目的蛋白，并应用亲和层析的方法纯化到了高纯度的重组蛋白，从而为研究中国明对虾SP奠定了良好的基础。