论文摘要
目的研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)培养体系中K562细胞周期,凋亡及黏附分子VCAM-1和促血管生成因子IL-8表达的影响,探讨硼替佐米的抗白血病活性是否与作用于骨髓微环境有关。方法建立MSCs和K562细胞的共培养体系,以终浓度为50nmol/L的硼替佐米处理K562细胞4~24h,绘制K562细胞生长曲线,流式细胞术测定K562细胞周期变化,Annexin-V/PI双染法检测K562细胞凋亡,半定量RT-PCR检测VCAM-1和IL-8 mRNA的表达。结果单独培养的K562细胞在硼替佐米作用后,G2/M期细胞比例增高,且呈时间依赖性。作用8h时,共培养组较单独培养组G0/G1期细胞比例偏高(29.4%vs 17.1%,P<0.05),作用时间延长至24h后,共培养组与单独培养组各期细胞比例无明显差异。单独培养的K562细胞在硼替佐米作用4h开始,即有约5%细胞出现凋亡,至12h时凋亡细胞比例为25.8±2.1%,延长作用时间至24小时,凋亡细胞比例略有增加,但与12h时相比无显著差异。共培养组凋亡细胞比例与单独培养组相比无显著差异。K562细胞与MSCs共培养可诱导K562细胞表达VCAM-1,MSCs在共培养前后表达VCAM-1无明显变化。硼替佐米作用24h后,K562细胞表达VCAM-1消失,MSCs表达VCAM-1明显下降。K562细胞和MSCs相互作用后,两者IL-8的表达均明显增高。硼替佐米作用24h后K562细胞IL-8的表达有所降低,但未降至共培养前K562表达IL-8的基线水平。而共培养组中MSCs在加入硼替佐米处理前后IL-8的表达无明显变化。结论MSCs可通过与白血病细胞的直接接触影响白血病细胞的细胞周期进程和增殖。与MSCs共培养导致的K562细胞周期阻滞于G0/G1期,硼替佐米可消除这一作用,且硼替佐米在MSCs存在的情况下依然可诱导白血病细胞发生凋亡,提示硼替佐米可拮抗MSCs对白血病细胞的保护作用。硼替佐米可显著抑制MSCs表达VCAM-1,表明硼替佐米的抗白血病活性除了直接诱导白血病细胞发生凋亡外,亦通过作用于MSCs,阻断白血病细胞与MSCs的黏附,并可部分降低两者黏附导致的K562高表达促血管生成因子IL-8,存在一定抗血管生成的作用。
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