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黄芪化学成分及其对神经细胞保护活性的研究

2020-11-23阅读(1030)

黄芪化学成分及其对神经细胞保护活性的研究

论文摘要

蒙古黄芪（Astragalus membranaceus（Fish.）Bge.var.mongholicus）为豆科（Leguminosae）黄芪属植物,是中国传统重要的补益药之一。具有益气升阳、固表止汗、利水消肿、托毒生肌的功效。 本研究主要利用色谱的方法,结合细胞生物学活性分析,对其化学成分进行跟踪分离,采用光谱技术（红外,紫外、核磁共振波谱和质谱技术）对得到的10个单体化合物进行结构解析和鉴定,分别鉴定为芒柄花素、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、9,10-二甲氧基紫檀烷3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、腺苷、肌醇甲苷、胡萝卜苷、β-谷甾醇和蔗糖,其中腺苷和肌醇甲苷为首次从该植物中分离得到。 选用神经细胞的模式细胞株PC12（rat pheochromocytoma cell line）细胞作为实验对象,利用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶（xanthine/xanthine oxidase,XA/XO）对细胞进行损伤,造成直接的氧化损伤模型。利用MTT（3-（4,5-dimethylthiazol-2-y1）-2,5-diphenylterazolium bromide）法分别检测了五种黄芪异黄酮对损伤的PC12细胞的保护效应;采用LDH（lactate dehydrogenase）法和荧光染色法,检测了五种异黄酮对细胞膜的影响;同时检测了芒柄花素、毛蕊异黄酮及其苷对细胞内抗氧化体物GSH（glutathione）和抗氧化酶SOD（superoxide dismutase）、GSH-Px（glutathioneperoxidase）等的影响。结果表明0.1 μg/ml毛蕊异黄酮和0.05 μg/ml芒柄花素对损伤细胞具有明显的保护活性,能通过提高细胞内源性抗氧化物含量,降低膜的流动性,稳定膜结构,来提高细胞的抗氧化能力,减轻细胞的脂质过氧化程度,保护细胞免受损伤。 利用DPPH（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）法和黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系检测了五种黄芪异黄酮在体外的直接抗氧化活性。毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷和芒柄花素对DPPH有机自由基的清除活性依次减弱,活性的大小与结构中羟基的位置和数目密切相关,由于半数有效剂量均高于100μg/ml,所以不是高效的有机自由基清除剂;在XA/XO体系中,五种异黄酮不具有清除超氧自由基的能力。同时,毛蕊

论文目录

  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 1 文献综述
  • 1.1 黄芪的研究现状
  • 1.1.1 黄芪的生物学特性
  • 1.1.2 黄芪的化学成分研究概况
  • 1.1.3 黄芪的药理作用研究概况
  • 1.2 氧化应激与神经退行性疾病
  • 1.2.1 自由基
  • 1.2.2 机体内活性氧对生物大分子的损伤
  • 1.2.3 氧化应激与神经退行性疾病
  • 1.3 黄酮类抗氧化剂的研究现状
  • 1.3.1 黄酮类化合物的神经保护作用
  • 1.3.2 黄酮类化合物的作用机制研究概况
  • 1.3.3 异黄酮类化合物研究进展
  • 1.4 自由基与中医气虚证
  • 1.5 本研究的选题依据和研究内容
  • 参考文献
  • 2 黄芪化学成分的分离和鉴定
  • 2.1 前言
  • 2.2 试验药材、试剂和材料
  • 2.3 提取和分离
  • 2.3.1 提取
  • 2.3.2 化学成分的分离
  • 2.4 单体化合物结构鉴定
  • 2.5 毛蕊异黄酮和芒柄花素定量分析方法初探
  • 2.5.1 紫外吸收波长的测定
  • 2.5.2 色谱条件的建立
  • 2.6 小结
  • 参考文献
  • 3 黄芪异黄酮对PC12细胞氧化损伤的保护作用的研究
  • 3.1 前言
  • 3.2 实验材料及设备
  • 3.3 实验方法
  • 3.3.1 PC12细胞的培养
  • 3.3.2 黄芪异黄酮的细胞毒性检测
  • 3.3.3 黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶损伤PC12细胞模型的建立
  • 3.3.4 黄芪异黄酮对损伤PC12细胞的保护作用
  • 3.3.5 细胞周期检测
  • 3.3.6 统计方法
  • 3.4 实验结果
  • 3.4.1 黄芪异黄酮对细胞毒检测
  • 3.4.2 黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶损伤PC12细胞模型的确立
  • 3.4.3 细胞形态观测结果
  • 3.4.4 细胞活力及LDH检测
  • 3.4.5 SOD、GSH-px活性及GSH、MDA的含量测定
  • 3.4.6 细胞周期检测结果
  • 3.5 讨论
  • 3.6 小结
  • 参考文献
  • 4 体外无细胞体系抗氧化活性检测
  • 4.1 前言
  • 4.2 试验材料及设备
  • 4.3 实验方法
  • 4.3.1 清除DPPH自由基的活性检测
  • 4.3.2 超氧自由基清除／产生活性的检测
  • 4.3.3 对黄嘌呤氧化酶抑制活性的检测
  • 4.3.4 数据处理
  • 4.4 实验结果
  • 4.4.1 四种异黄酮不同浓度对DPPH自由基的清除率
  • 4.4.2 对超氧阴离子自由基的清除／产生的检测
  • 4.4.3 黄芪异黄酮对黄嘌呤氧化酶酶活影响的检测
  • 4.5 讨论
  • 4.6 小结
  • 参考文献
  • 5 黄芪异黄酮对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用的研究
  • 5.1 前言
  • 5.2 实验材料及设备
  • 5.3 实验方法
  • 5.3.1 PC12细胞的培养
  • 5.3.2 谷氨酸损伤PC12细胞模型的建立
  • 5.3.3 黄芪异黄酮对谷氨酸损伤的PC12细胞的影响
  • 5.3.4 细胞形态观测Hochest33342和PI双染
  • 5.3.5 LDH，SOD，GSH-Px和MDA的检测
  • 5.3.6 对细胞周期的影响
  • 5.3.7 流式细胞仪检测Bcl-2和Bax蛋白的表达
  • 5.3.8 统计学方法
  • 5.4 实验结果
  • 5.4.1 谷氨酸损伤PC12细胞模型的建立
  • 5.4.2 黄芪异黄酮对谷氨酸损伤的PC12细胞活力及LDH释放的影响
  • 5.4.3 细胞形态观测
  • 5.4.4 黄芪异黄酮对谷氨损伤的PC12细胞SOD、GSH-Px、GSH和MDA
  • 5.4.5 细胞周期的影响
  • 5.4.6 流式细胞仪检测Bcl-2
  • 5.5 讨论
  • 5.6 小节
  • 参考文献
  • 6 结论与展望
  • 6.1 主要研究成果和结论
  • 6.2 前景与展望
  • 论文创新点
  • 作者在读期间论文发表情况
  • 致谢
  • 附录
  • 化合物M1图谱
  • 化合物M3图谱
  • 化合物M4图谱
  • 化合物M5图谱
  • 化合物M6图谱
  • 化合物M7图谱
  • 化合物M11图谱
  • 化合物M17图谱
  • 化合物M23图谱

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