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ERβ对激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和PC-3M增殖和凋亡的影响

2020-11-23阅读(840)

ERβ对激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和PC-3M增殖和凋亡的影响

论文摘要

目的:探讨ERβ对激素抵抗性前列腺癌细胞株PC-3和PC-3M的增殖和凋亡的影响,为前列腺癌治疗研究提供新的思路与实验依据。方法:以基因重组技术构建pCDNA3.1-hERβ、pEGFP-C1-hERβ质粒和pGCsilencerTM U6/Neo/GFP-siRNA-ERβ质粒;应用真核细胞转染技术转染人前列腺癌细胞株PC3及PC-3M,观察并研究对细胞增殖、凋亡及侵袭能力方面的影响。结果:（ 1 ）通过酶切鉴定和测序证明pCDNA3.1-hERβ、pEGFP-C1-hERβ和pGCsilencerTM U6/Neo/GFP-siRNA-ERβ的重组质粒构建成功。（2）将pCDNA3.1-hERβ、pEGFP-C1-hERβ转染前列腺癌细胞PC-3和PC-3M,成功建立了高表达ERβ的细胞株;将pGCsilencerTMU6/Neo/GFP-siRNA-ERβ转染前列腺癌细胞PC-3和PC-3M,成功建立了ERβ沉默的细胞株。（3）生长抑制实验证明pCDNA3.1-hERβ对PC-3和PC-3M细胞增殖具有抑制作用;而转染pGCsilencerTM U6/Neo/GFP-siRNA-ERβ的细胞则无抑制作用。证实ERβ能明显抑制前列腺癌细胞的生长。（4）证实ERβ可诱导PC-3和PC-3M细胞凋亡;同时抑制了细胞增殖相关基因cyclinD1和抑制凋亡基因Bcl-XL、AKt和Survivin的表达;而上调了增殖抑制基因P21和促凋亡基因（caspase3、caspase9等）的表达。（5）基质胶浸润分析实验、酶谱分析实验表明ERβ可使前列腺癌细胞的侵袭力下降。结论:通过增加和降低ERβ在细胞中的表达,发现ERβ可抑制前列腺细胞PC-3和PC-3M的生长,促进其凋亡,降低其浸润特性。

论文目录

  • 英文缩写词表
  • 前言
  • 第一章 文献回顾
  • 第一节 雌激素受体β（ERβ）的结构、功能及其与疾病的关系
  • 1.1 雌激素受体β（ERβ）的结构
  • 1.2 ERβ的功能
  • 1.3 ERβ在人体内的分布
  • 1.4 ERβ与肿瘤的关系
  • 第二节 ERβ与前列腺癌的关系
  • 2.1 雌激素受体的表达
  • 2.2 ERβ亚型与前列腺癌发生的关系
  • 2.3 雌激素受体β亚单位的检测和前列腺癌的治疗
  • 2.4 ERβ研究展望
  • 第二章 实验材料和方法
  • 第一节 实验材料
  • 1.1 主要仪器
  • 1.2 主要试剂
  • 1.3 质粒
  • 1.4 抗体
  • 1.5 菌株
  • 1.6 实验标本
  • 1.7 细胞
  • 第二节 实验方法
  • 2.1 hERβ全长基因的获得
  • 2.2 pcDNA3.1-hERβ重组质粒的构建
  • 2.3 pEGFP-C1-hERβ重组质粒的构建
  • TMU6/Neo/GFP-siRNA-ERβ 重组质粒的构建与鉴定'>2.4 pGCsilencerTMU6/Neo/GFP-siRNA-ERβ 重组质粒的构建与鉴定
  • 2.5 细胞培养及重组质粒的转染
  • 2.6 细胞生长抑制试验-MTT 法
  • 2.7 凋亡细胞的检测
  • 2.8 蛋白水平分析—Western blot
  • 2.9 RT-PCR 半定量分析
  • 2.10 PC3 及PC-3M 细胞免疫细胞化学染色
  • 2.11 酶谱分析
  • 第三章 实验结果
  • 第一节 重组质粒的构建
  • 1.1 成功构建pcDNA3.1-hERβ重组质粒
  • 1.2 成功构建pEGFP-C1-hERβ重组质粒
  • TMU6/Neo/GFP-siRNA-ERβ质粒'>1.3 成功构建pGCsilencerTMU6/Neo/GFP-siRNA-ERβ质粒
  • 第二节 细胞培养及重组质粒的转染
  • 2.1 绿色荧光蛋白的观察
  • 2.2 免疫细胞化学方法测定hERβ
  • 2.3 蛋白质水平鉴定hERβ
  • 2.4 m RNA 水平鉴定hERβ
  • 第三节 ERβ 对PC-3 和PC-3M 细胞增殖抑制实验的影响
  • 3.1 ERβ对细胞形态及数目的影响
  • 3.2 ERβ对细胞活性的影响
  • 3.3 ERβ对细胞增殖周期的影响
  • 第四节 ERβ 对PC-3 及PC-3M 细胞凋亡的影响
  • 4.1 凋亡指标检测
  • 4.2 ERβ对调节增殖和凋亡相关基因的影响
  • 第五节 ERβ 对细胞侵袭性的影响
  • 5.1 基质胶浸润分析实验
  • 5.2 酶谱分析实验
  • 5.3 RT-PCR 分析MMP9 的mRNA 表达
  • 第四章 讨论
  • 第一节 质粒构建与转染
  • 第二节 ERβ 对细胞增殖调控的影响
  • 第三节 ERβ 对细胞凋亡信号传导的影响
  • 第四节 ERβ 对细胞侵袭能力的影响
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 攻读博士学位期间已发表的文章
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 致谢

    • 相关论文文献

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