牛乳酪蛋白降血压肽的制备及活性研究

论文摘要

酪蛋白是牛乳中主要的蛋白质,含有人体生长发育所必需的氨基酸。酪蛋白不但具有非常重要的生理功能,还是生物活性肽的重要来源,其中酪蛋白降血压肽以安全性高、无副作用等优点具有十分重要的研究价值和实用价值。本课题以牛乳酪蛋白为原料,用碱性蛋白酶进行水解。水解产物经过超滤分离、脱盐精制,获得具有高ACE抑制活性的降血压肽,并通过动物实验进一步证明了降血压肽的降压效果。本实验以碱性蛋白酶作为水解用酶,以生产牛乳酪蛋白降血压肽。通过单因素、正交试验对碱性蛋白酶水解酪蛋白的水解条件进行优化,获得水解降血压肽的最佳条件：底物浓度为15%、温度为50℃、pH为9.5、加酶量为0.15%,该条件下的水解度为23.15%,ACE抑制活性为51.82%。降血压肽酶解液用截留分子量为10kDa和3kDa的超滤膜进行超滤。结果表明,超滤后能不同程度的提高ACE抑制活性,其中小于3kDa的水解液的ACE抑制活性为58.36%。采用离子交换树脂对水解样品进行脱盐研究,以10倍柱体积/小时流速,经阴阳离子文换树脂后脱盐率和氮回收率均在80%以上,脱盐处理后样品的ACE抑制活性有所增加。以原发性高血压大鼠(SHR)为动物模型,尾套法间接测定大鼠血压收缩压,评价牦牛乳酪蛋白多肽的降血压功能。结果表明,降血压肽组在单次给药后6小时收缩压值出现最低值,而卡托普利组在4小时出现最低值。连续20天给药,低剂量组(600mg/KgBW)、中剂量组(1200mg/KgBW)、高剂量组(2400mg/KgBW)的收缩压值均低于对照组,研究说明降血压肽对SHR具有辅助降血压作用,对体重增长无影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 研究目的和意义
• 1.2 高血压
• 1.3 降血压肽
• 1.3.1 降血压肽
• 1.3.2 降血压肽的作用机制
• 1.3.3 降血压肽的结构和功能分析
• 1.3.4 降血压肽的制备
• 1.3.4.1 直接提取法
• 1.3.4.2 体外降解蛋白质法
• 1.3.4.3 微生物发酵法
• 1.3.4.4 合成法
• 1.3.5 降血压肽的评价方法
• 1.3.5.1 体外试验
• 1.3.5.2 体内试验
• 1.3.6 降血压肽的生理效果
• 1.4 存在的问题及展望
• 1.5 主要研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 试剂与材料
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 实验动物
• 2.2 方法
• 2.2.1 蛋白质含量的测定
• 2.2.1.1 实验原理
• 2.2.1.2 结果计算
• 2.2.2 水分的测定
• 2.2.3 灰分的测定
• 2.2.4 酶活力的测定
• 2.2.4.1 标准曲线的绘制
• 2.2.4.2 样品的测定
• 2.2.4.3 酶活力的计算
• 2.2.5 酪蛋白降血压肽的制备
• 2.2.6 水解度的测定：pH-stat法
• 2.2.7 采用RP-HPLC法测定ACE体外抑制活性
• 2.2.7.1 原理
• 2.2.7.2 药品的配制
• 2.2.7.3 测定
• 2.2.7.4 洗脱条件
• 2.2.8 单因素实验
• 2.2.8.1 酶解温度的影响
• 2.2.8.2 底物浓度的影响
• 2.2.8.3 加酶量的影响
• 2.2.8.4 pH的影响
• 2.2.8.5 酶解时间的确定
• 2.2.9 正交实验
• 2.2.10 降血压肽的超滤分离
• 2.2.11 降血压肽的脱盐处理
• 2.2.11.1 树脂的预处理
• 2.2.11.2 氮回收率和脱盐率的计算
• 2.2.12 体内活性试验方法
• 2.2.12.1 SHR大鼠血压的测定
• 2.2.12.2 动物的日常喂养
• 2.2.12.3 单次给药SHR大鼠24h内血压值的变化
• 2.2.12.4 单次给药24h内Wistar大鼠血压值的变化
• 2.2.12.5 多次给药SHR大鼠血压值的变化
• 2.2.12.6 多次给药Wistar大鼠血压值的变化
• 2.2.12.7 多次给药对SHR大鼠组织器官重量的影响
• 2.2.12.8 多次给药对Wistar大鼠组织器官重量的影响
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 酪蛋白的成分分析
• 3.2 最佳酶解条件的选择
• 3.2.1 水解用酶的确定
• 3.2.2 单因素实验结果
• 3.2.2.1 酶解温度的确定
• 3.2.2.2 底物浓度的确定
• 3.2.2.3 加酶量的确定
• 3.2.2.4 pH的确定
• 3.2.2.5 酶解时间的确定
• 3.2.3 正交实验结果
• 3.2.3.1 正交实验结果
• 3.2.3.2 以水解度为指标的正交实验结果分析
• 3.2.3.3 以抑制活性为指标的正交实验结果分析
• 3.2.3.4 最佳酶解条件的确定
• 3.3 降血压肽的超滤分离
• 3.3.1 超滤
• 3.3.2 超滤结果分析
• 3.4 降血压肽的脱盐精制
• 3.4.1 脱盐处理结果
• 3.4.2 脱盐对抑制活性的影响
• 3.5 酪蛋白降血压肽的体内活性
• 3.5.1 单次给药SHR大鼠24h内血压值的变化
• 3.5.2 单次给药Wistar大鼠24h内血压值的变化
• 3.5.3 多次给药SHR大鼠血压值的变化
• 3.5.4 多次给药Wistar大鼠血压值的变化
• 3.5.5 多次给药对SHR大鼠体重的影响
• 3.5.6 多次给药对Wistar大鼠体重的影响
• 3.5.7 多次给药对SHR大鼠组织器官的影响
• 3.5.8 多次给药对Wistar大鼠组织器官的影响
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录