鹅不食草鉴别及其抗过敏性鼻炎活性物质筛查的初步研究

论文摘要

研究背景目前过敏性鼻炎主要治疗方法有:脱敏法、激光疗法、微波疗法和药物治疗,但这些方法均存在不足。脱敏法治疗周期长且过敏原不纯会引起过敏性休克;激光和微波疗法则可能破坏患者鼻粘膜;而药物治疗过敏性鼻炎时,抗组胺类药物会引起嗜睡、困倦及中枢抑制等副作用;皮质醇类药物则会导致内分泌紊乱、股骨头坏死、肌肉萎缩;减充血剂慎用于高血压加冠心病患者;而膜保护剂的起效时间在1周后,属预防性药物,因而,以上各种疗法的这些局限性限制了它们在临床的广泛应用。因此,有必要探求一种疗效显著且不良反应小的治疗过敏性鼻炎方法,而中草药由于毒副作用少则不失为一个方向。鹅不食草属菊科植物Centipedaminima（L.）A.Br.et Aschers.,有通鼻窍,止咳功效。鹅不食草在民间常用于治疗百日咳、急慢性鼻炎、肥厚性鼻炎及过敏性鼻炎等鼻咽喉疾病。据报道,临床上鹅不食草的粉末、乙醇浸泡液用于治疗过敏性鼻炎患者,取得良好效果;实验研究发现,鹅不食草挥发油对过敏性鼻炎有确切的疗效,而从鹅不食草中分离得到的黄酮类、倍半萜化合物能抑制组织胺从肥大细胞中的释放。但鹅不食草治疗过敏性鼻炎的活性物质并不清楚。故筛选其抗过敏性鼻炎的有效部位,进而确定其有效成分具有重要意义。鹅不食草分布广泛,主产于浙江、湖北、广东、广西、江西等地,其同种异名和异种同名的情况相当普遍,所以要进行药理研究,需先进行鹅不食草原药材的鉴别。鹅不食草在现行的中国药典中只有性状和显微鉴别,故有必要建立一种鉴别鹅不食草药材的新方法。研究目的1、探讨建立鉴别鹅不食草的方法。2、建立过敏性鼻炎动物模型。3、探讨鹅不食草对过敏性鼻炎的作用效果及起效部位。实验方法1、用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析鹅不食草挥发油。总离子流色谱图中的各色谱峰经质谱扫描后得到质谱图,质谱信息用wiley275数据库检索、人工谱图解析,查对有关质谱文献,确认化合物。比较不同产地的色谱图,确定鹅不食草的专属峰。2、用OVA过敏原鼻滴致敏建立豚鼠过敏性鼻炎动物模型。结合症状学、免疫学、组织病理学结果判断过敏性鼻炎模型是否建立成功。3、用水、乙醇、石油醚分别抽提鹅不食草,得到的3种不同的提取物分别滴鼻治疗过敏性鼻炎豚鼠,同时用生理盐水滴鼻正常豚鼠和模型豚鼠作为对照。用光学显微镜观察不同组别豚鼠鼻粘膜组织结构,用ELISA方法检测治疗前后豚鼠血清中OVA-slgE浓度,并结合其抓鼻和打喷嚏次数的行为变化来考察鹅不食草不同抽提物的作用效果及起效部位。统计方法所有数据采用均数±标准差（（?）±s）表示,SPSS13.0统计软件分析,采用的统计方法有重复测量方差分析、配对样本t检验、单因素方差分析（one-wayANOVA）,并进一步做多重比较。显著性水平为α=0.05。结果1、广西南宁、江西清江、浙江衢州、广东梅州和广东潮州这五个产地的鹅不食草挥发油中共有的化合物有6个,分别为乙酸菊烯酯（Chrysanthenylacetate）、麝香草酚（Thymol）、环十一烯,1,3a,4,5a-四甲基-,（1R,3aS,5aS,8aR）（Berkheyaradulene）、反式石竹烯（trans-Caryophyllene）、棕榈酸（Hexadecanoicacid）、叶绿醇（Phytol）,其对应的指纹峰可以用于鉴别鹅不食草。2、症状学观察发现,模型组豚鼠经激发后抓鼻、打喷嚏次数都与正常对照组比较,差异均有显著性意义;ELISA方法检测发现模型组豚鼠经过OVA致敏、激发后血清中的OVA-slgE浓度明显升高,而正常对照组在造模前后血清中OVA-slgE浓度差异没有显著性意义（P＞0.05）;光学显微镜下观察到模型组鼻粘膜上皮部分脱落,排列不整,杯状细胞增生。固有层组织明显水肿,大量嗜酸性粒细胞浸润:而正常对照组鼻粘膜结构完整、清晰,披覆假复层纤毛上皮。粘膜固有层组织疏松,散在淋巴细胞及少量嗜酸性粒细胞浸润。3、过敏性鼻炎动物经鹅不食草乙醇提取物（Ethanol extract of HerbaCentipedae,EeH）、鹅不食草水提取物（Water extract of Herba Centipedae,WeH）、鹅不食草石油醚提取物（Petroleum ether extract of Herba Centipedae,Peh）治疗后,症状学观察发现,第2次激发后30min内,EeH组、WeH组、PeH组抓鼻和打喷嚏次数与模型组比较,差异没有显著性意义;第9次激发后30min内,EeH组、WeH组、PeH组抓鼻和打喷嚏次数与模型组比较,（P＜0.05）,差异均有显著性意义,次数均减少,减少幅度为EeH组＞WeH组>PeH。;ELISA方法检测发现,治疗组在治疗后血清中OVA-slgE浓度均降低,降低的幅度依次为EeH组＞PeH组＞WeH组;光学显微镜下观察发现,鼻粘膜嗜酸性粒细胞均明显减少,其中EeH组仅有极少量嗜酸性粒细胞浸润,WeH组有少量嗜酸性粒细胞浸润,PeH组仍见灶性分布的嗜酸性粒细胞。结论1、6个共有化合物在色谱图中对应的指纹峰可以作为鉴别鹅不食草的依据。2、本实验建立的模型具有过敏性鼻炎打喷嚏、流鼻涕的典型症状;具有过敏性鼻炎的组织病理学特征——嗜酸性粒细胞浸润;免疫学结果符合Ⅰ型变态反应的发生机制（即豚鼠在造模后血清中OVA-slgE浓度升高）。可以判断模型建立成功。3、鹅不食草不同提取物均能减轻过敏性鼻炎豚鼠打喷嚏、流鼻涕的症状,不同程度减轻过敏性鼻炎豚鼠鼻粘膜组织病理损伤,抑制嗜酸性粒细胞浸润,能降低过敏性鼻炎豚鼠血清中OVA-slgE的浓度且作用效果大小依次为EeH组＞PeH组>WeH组。因此判断,鹅不食草乙醇提取物治疗豚鼠过敏性鼻炎的效果最佳。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 鹅不食草挥发油的GC-MS分析及药材的鉴别
• 前言
• 第1节 鹅不食草挥发油的提取和GC-MS分析
• 1 材料、仪器与试剂
• 2 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第2节 不同产地鹅不食草中挥发油的成分分析及鉴别
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二章 豚鼠过敏性鼻炎动物模型的建立
• 前言
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三章 鹅不食草不同提取物对过敏性鼻炎动物的治疗作用
• 前言
• 第1节 鹅不食草不同提取物的制备
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第2节 鹅不食草提取物对豚鼠过敏性鼻炎的药效学研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 附录Ⅰ 英文缩略词表
• 附录Ⅱ 附图及附表
• 攻读学位期间发表论文
• 致谢
• 研究生毕业论文统计学审稿证明