张红丹吴旦平汪波商江峰陈颖苏文捷宋佳
(苏州大学附属常熟市第一人民医院215500)
【摘要】目的：探讨细胞角蛋白19在乳腺癌阴性前哨淋巴结转移中的预测价值以及RT-PCR检验的临床意义。方法：选取我院手术治疗的51例原发性乳腺癌患者，均在手术后对前哨淋巴结与非前哨淋巴结进行病理检测，并应用免疫组化与RT-PCR检测细胞角蛋白19的表达。结果：RT-PCR检验显示细胞角蛋白19阳性表达22例，免疫组化检验显示细胞角蛋白19阳性表达21例，两种检验方式比较无明显差异(P>0.05)，但均好于HE染色常规病理检查结果(P<0.05)。结论：细胞角蛋白是乳腺癌疾病中具有较高特异性的标志物，而RT-PCR是临床检验的有效方式，临床开展检验能够提高微转移灶的检出率。
【关键词】乳腺癌细胞角蛋白19前哨淋巴结
【中图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）18-0253-01
细胞角蛋白19主要是上皮细胞单抗，在乳腺癌细胞与健康乳腺细胞中均存在表达，但淋巴细胞中无表达，是临床开展上皮肿瘤转移检测的有效标志物之一[1]。RT-PCR是当前临床广泛应用的检测方法，具有较高的特异性与敏感度[2]，可有效辨别淋巴结、血液与骨髓中的微转移灶[3]。本次研究针对51例患者通过免疫组化与RT-PCR方式检测细胞角蛋白19表达状况，并探讨该标志物对前哨淋巴结转移的预测价值，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取我院2012年1月至2014年1月手术治疗的51例原发性乳腺癌患者，肿瘤均单发，肿块直径为1.2～3.8cm。样本年龄36～72岁，平均(53±4.1)岁；浸润性导管癌47例，导管内癌伴随微浸润4例。所有样本均采用乳腺癌改良根治术。
1.2入选标准
①既往不存在腋窝手术史；②体格检查中锁骨与腋窝部位为触摸到明显肿大的淋巴结；③既往无辅助化疗史。
1.3方法
1.3.1前哨淋巴结定位与取材方法
手术开展前采用亚甲蓝(江苏济川制药公司)开展定位，将药物沿乳晕周围或肿块边缘乳腺向乳晕部开展皮下注射[4]。然后常规开展手术，待15min后，将皮瓣游离于腋窝部位观察蓝染淋巴管所连接的淋巴结，确定前哨淋巴结位置后将其去除。应用手术刀片将获取淋巴结切分至2半，其中1份采用液氮冷冻，随后给予细胞角蛋白19的相关检测，另1份开展常规病理检查。
1.3.2细胞角蛋白19的检验方法
本组患者均应用免疫组化与RT-PCR检测细胞角蛋白19的表达情况。
①RT-PCR：选用invitrogen公司生产的Trizol，并有效提取总RNA。将100mg组织样本放置于匀浆器中，添加2mL的Trizol对匀浆进行冷冻5min，然后增加0.2mL氯仿振荡15s，放置3min后，应用离心机获取上清液[5]。再增加0.5mL异丙醇放置60min，应用离心机后弃上清，采用1mL乙醇进行洗涤沉淀，再经离心弃上清，而后风干沉淀获取RNA并置于-80℃环境中进行储存。应用琼脂糖凝胶电泳对RNA样本开展检测，记录RNA浓度并应用cDNA合成试剂盒完成转录合成。在有效反应条件下置于42℃环境中反应1h，然后在99℃环境下进行5min加热，最后迅速冷却为4℃，获取cDNA，并开展PCR扩增。再将10μL扩增物加入琼脂糖凝胶中开展电泳，利用紫外透射仪进行结果观察，依据电泳条带的实际亮度和内参的比较值来总结基因表达。
②免疫组化法：将所有样本的石蜡标本进行切片，厚度为4μm，间隔为25μm。选用福州迈新生物技术有限公司僧产的CK19试剂盒，依据说明书要求具体开展操作。细胞角蛋白19主要在胞浆表达，如若标本胞浆中存在棕黄色颗粒便表示为阳性，不存在棕黄色颗粒便表示为阴性。
1.4统计学方法
采用SPSS13.0软件进行分析，组间差异采用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1常规病理检验及前哨淋巴结检出情况
本组51例患者共取出660枚腋窝淋巴结，人均12.9枚；共取出88枚前哨淋巴结，人均1.73枚。在常规病理检查下显示17例存在腋窝淋巴结转移，其中15例为前哨淋巴结阳性者，而前哨淋巴结与非前哨淋巴结均阳性者8例，前哨淋巴结阳性而非前哨淋巴结阴性者7例，前哨淋巴结阴性而非前哨淋巴结阳性者2例，其假阴性率为11.76%，前哨淋巴结的阳性率为29.41%。
2.2常规病理检验与细胞角蛋白19的表达结果比较
详见表1-2。
表1RT-PCR检测结果与常规病理检验结果比较[n(%)]
前
3讨论
本次研究中在RT-PCR检验结果中，常规病理检验表现为阳性的15例前哨淋巴结中均存在细胞角蛋白19的阳性表达，并且呈阴性的前哨淋巴结中也存在7例的细胞角蛋白19呈阳性表达，提示该种检验方式能够有效对常规病理检验进行补充，发现更多的微转移灶。同时，研究中2例假阴性样本中的细胞角蛋白19也呈现阳性表达，进一步证明细胞角蛋白19对乳腺癌前哨淋巴结微转移的灵敏度更佳。
研究中RT-PCR与常规病理检验结果比较存在统计学差异，进一步说明应用RT-PCR检测细胞角蛋白19表达，能够提高前哨淋巴结微转移的检出率。同时研究中还采用了免疫组化检验方式，其检验的表达结果与RT-PCR结果比较无明显差异，进一步证明了研究获取结果的科学性。
综上所述，细胞角蛋白是乳腺癌疾病中具有较高特异性的标志物，而RT-PCR是临床检验的有效方式，临床开展检验能够提高微转移灶的检出率。
参考文献
[1]左思,杨伟萍,韦长元,等.细胞角蛋白19和人乳腺球蛋白在乳腺癌阴性前哨淋巴结中的表达及临床意义[J].实用老年医学,2012,26(3):242-244
[2]梁志东,庄亚强,廖启洪,等.定量RT-PCR法检测乳腺癌前哨淋巴结CK19的研究[J].柳州医学,2009,22(1):29-30
[3]毛莹,邹天宁,杨庄青,等.新辅助化疗前后乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19表达变化及其临床意义[J].中华乳腺病杂志,2012,6(4):23-26
[4]杨莉.乳腺癌外周血骨桥蛋白、细胞角蛋白19级粘蛋白1检验及临床意义[J].国际检验医学杂志,2011,32(3);305-307
[5]叶春梅,罗凤玲,薛明兴,等.乳腺癌前哨淋巴结中细胞角蛋白19的表达及临床意义[J].中国综合临床,2010,26(7):751-753