论文摘要
为了探讨多基因联合对骨肉瘤细胞S180的抑制作用,本研究以鸡痘病毒为载体,应用具有不同抑癌机制的三种基因VP3基因、HN基因、IL-18基因通过同源重组的方法构建了分别含有VP3基因、HN基因、IL-18基因的三株重组鸡痘病毒:vFVVP3HNIL-18、vFVVP3和vFVHN。旨在探讨VP3基因、HN基因、IL-18基因的联合抑制骨肉瘤S180细胞的抑瘤效应。在实验中应用Souther blot、Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光等方法检测外源基因的重组情况及多基因联合重组鸡痘病毒在骨肉瘤细胞内的表达。实验结果显示,外源基因已重组入鸡痘病毒基因组中,且可在鸡胚成纤维细胞中有效表达。采用吖锭橙/溴化乙锭染色、超薄切片、基因组DNA电泳、DCFA染色和罗丹明123染色等方法观察了多基因联合重组鸡痘病毒感染致骨肉瘤S180肿瘤细胞的死亡方式及通路。实验结果显示,多基因联合重组鸡痘病毒感染骨肉瘤S180细胞后可抑制其生长并最终导致骨肉瘤S180细胞凋亡,而且多基因联合重组鸡痘病毒所诱导的细胞凋亡的方式主要是通过线粒体途径发生的。另外,多基因联合重组鸡痘病毒还上调了骨肉瘤S180细胞表面MHC-I分子的表达,并提高骨肉瘤S180细胞的免疫原性。在体内抑瘤实验中,本研究复制了BALB/C小鼠荷S180骨肉瘤模型,探讨了多基因联合重组鸡痘病毒体内抑制骨肉瘤S180的作用,实验结果显示,多基因联合重组鸡痘病毒可有效抑制实体骨肉瘤S180的生长并刺激机体产生抗肿瘤免疫反应。本研究实验结果表明,尽管vFVVP3和vFVHN均有一定的抑瘤作用,但vFVVP3HNIL-18的抑瘤率显著高于vFVVP3和vFVHN。研究提示,多基因联合重组鸡痘病毒在动物体内外发挥了抑制骨肉瘤细胞S180的作用,并且具有不同抑瘤机制的多基因联合（HN基因、IL-18基因和VP3基因）具有协同抑制骨肉瘤细胞S180的效应。
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