同源四倍体不结球白菜再生体系的研究

论文摘要

白菜类蔬菜是离体培养再生困难的一类作物,而基因工程等高科技育种技术都是建立在稳定可靠的高频率离体再生体系的基础上。探讨不结球白菜,特别是迄今未见报道的同源四倍体不结球白菜的高频离体再生体系具有重要的理论和实践意义。 本文以6个同源四倍体不结球白菜和2个二倍体不结球白菜的子叶为材料,研究离体培养过程中基因型对不定芽再生的影响,正交试验确定二、四倍体不结球白菜再生优化培养基;探讨材料再生能力与内源激素之间的相关性;并以四倍体不结球白菜雄性不育系为材料,研究外植体类型、生理苗龄、琼脂浓度、不同生长素类及细胞分裂素类生长调节剂等对离体不定芽再生的影响;再以二、四倍体不结球白菜雄性不育系的子叶为外植体,研究离体培养下不定芽诱导过程中生理生化的变化。最后对二、四倍体不结球白菜不定芽生根获得再生植株,对其驯化。进行形态及染色体等倍性鉴定,旨在建立同源四倍体不结球白菜稳定、高频的再生体系。结果表明: 材料的基因型是影响离体再生的关键因素。本试验通过正交设计研究TDZ(0.1、0.5和1.0 mg·L-1)、NAA(0.1、0.5和0.8 mg·L-1)和AgNO3(0、5.0、和10.0mg·L-1)3因素3水平对二、四倍体不结球白菜子叶离体培养,诱导不定芽。正交设计极差分析确定二、四倍体不结球白菜再生优化培养基和各因素的优水平及因子的影响顺序。在相同配方下对四倍体材料再生能力比较和根据最高诱导率进行再生能力比较,2种方法表明再生能力强弱与外植体内源激素细胞分裂素（ZRs）和生长素（IAA）含量的绝对值无显著相关,而与ZRs/IAA比值的大小显著相关,相关系数分别是0.9428和0.8857。比较2组二、四倍体不结球白菜再生能力表明四倍体不结球白菜再生能力强的其二倍体不结球白菜再生能力也强。二、四倍体不结球白菜内源激素含量表明四倍体不结球白菜内源激素含量比相应二倍体不结球白菜的有所增加。 以同源四倍体不结球白菜雄性不育系（4xCMS）为材料,研究发现外植体不同,不定芽再生能力大不相同。供试的三种外植体在相同条件下不定芽再生能力依次为子叶>下胚轴>根。外植体是子叶时,以5d为最佳苗龄,琼脂浓度为0.8%时,4xCMS的不定芽再生率最高,为83.3%。通过对不同细胞分裂素类和生长素类生长调节剂的配合使用,表明NAA和TDZ的配合可显著提高不定芽的再生率。 以二、四倍体不结球白菜雄性不育系为材料,研究在MS+0.5mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-1NAA+10.0mg·L-1AgNO3+0.8%琼脂+3%蔗糖培养基上,子叶离体培养中3种抗氧化酶:过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的酶活变化、可溶性

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 主要缩略词表
• 引言
• 第一部分 文献综述
• 1 多倍体植物概况
• 1.1 多倍体植物的产生途径
• 1.2 多倍体植物的鉴定方法
• 1.3 多倍体植物在农业中的应用
• 2 多倍体植物离体培养的研究进展
• 3 白菜类蔬菜离体培养的研究进展
• 4 植物离体培养中的影响因素
• 4.1 植物材料基因型影响不定芽的再生
• 4.2 植物外植体类型及生理状态影响不定芽的再生
• 4.3 植物激素对不定芽再生的影响
• 4.4 生长调节物质对不定芽再生的影响
• 3影响白菜类蔬菜不定芽的再生'>4.5 AgNO₃影响白菜类蔬菜不定芽的再生
• 4.6 培养基影响不定芽的再生
• 5 植物形态发生过程中生理生化特性的研究
• 参考文献
• 第二部分 研究报告
• 第一章 四倍体及二倍体不结球白菜不定芽诱导培养基的筛选及与内源激素含量的相关性
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 无菌苗的培养
• 1.2.2 子叶的离体培养
• 1.2.3 正交实验设计
• 1.2.4 内源激素的测定
• 2 结果与分析
• 2.1 四倍体不结球白菜不定芽诱导培养基的筛选
• 2.2 二倍体不结球白菜不定芽诱导培养基的筛选
• 2.3 不结球白菜子叶内源激素含量的测定
• 2.4 四倍体不结球白菜子叶再生能力与内源激素含量的相关性
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二章 关于四倍体不结球白菜雄性不育系离体不定芽再生率的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 无菌苗的培养
• 1.2.2 不同苗龄的子叶对不定芽再生的影响
• 1.2.3 琼脂浓度对子叶不定芽再生的影响
• 1.2.4 外植体类型对不定芽再生的影响离体培养
• 1.2.5 不同细胞分裂素类生长调节剂对子叶不定芽再生的影响
• 1.2.6 不同生长素类生长调节剂对子叶不定芽再生的影响
• 2 结果分析
• 2.1 子叶苗龄与琼脂浓度对不定芽再生的影响
• 2.2 外植体类型对不定芽再生的影响
• 2.3 不同细胞分裂素类生长调节剂对子叶不定芽再生的影响
• 2.4 不同生长素类生长调节剂对子叶不定芽再生的影响
• 3 讨论
• 参考文献
• 第三章 二、四倍体不结球白菜诱导不定芽过程中生理生化的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 无菌苗的培养
• 1.2.2 子叶的离体培养
• 1.2.3 可溶性蛋白质含量的测定
• 1.2.4 POD酶活的测定
• 1.2.5 CAT酶活的测定
• 1.2.6 SOD酶活的测定
• 1.2.7 酯酶同工酶电泳
• 2 结果分析
• 2.1 子叶培养过程中可溶性蛋白质含量的变化
• 2.2 子叶培养过程中SOD酶活变化
• 2.3 子叶培养过程中CAT酶活变化
• 2.4 子叶培养过程中POD酶活变化
• 2.5 子叶培养过程中酯酶同工酶分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 第四章 二、四倍体不结球白菜再生植株驯化培养
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 不定芽的生根
• 1.2.2 再生植株的驯化
• 1.2.3 再生植株的倍性鉴定
• 2 结果与分析
• 2.1 生长素类生长调节剂对4xCMS不定芽生根的影响
• 2.2 再生植株的驯化
• 2.3 二、四倍体不结球白菜倍性鉴定
• 2.3.1 间接形态学鉴定
• 2.3.2 直接染色体鉴定
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文结论
• 发表论文情况
• 致谢