紫杉醇联合TRAIL诱导MCF-7乳腺癌细胞系凋亡机制研究

论文摘要

目的:探讨紫杉醇对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosisfactor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）诱导MCF-7乳腺癌细胞系凋亡的影响及其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度单药紫杉醇、单药TRAIL及紫杉醇与TRAIL不同联合给药方案对MCF-7细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI染色法流式细胞仪分析不同联合给药方案对MCF-7细胞凋亡的影响;PI染色法流式细胞仪分析不同给药方案对MCF-7细胞周期分布的影响;RT-PCR法检测TRAIL受体DR4、DR5在MCF-7乳腺癌细胞中的表达水平。结果:MTT法发现紫杉醇对MCF-7乳腺癌的抑制作用呈剂量依赖性,随药物浓度的升高抑制率逐渐升高,IC50为4.85μM;TRAIL在浓度＜0.05μM时,加药组与空白组抑制作用比较差异无统计学意义（P＞0.05）,当药物≥0.50μM时,加药组与空白组抑制作用比较差异有统计学意义（P＜0.05）,但随药物浓度逐渐增高,抑制作用未见相应增加（P＞0.05）,呈现一定的耐药;选紫杉醇0.5μM、TRAIL 0.5μM为联合给药浓度。MTT法证实不同的联合给药方案对MCF-7乳腺癌细胞系抑制强度不同,联合给药组1（同时给药紫杉醇和TRAIL）和联合给药组2（先给予TRAIL再给予紫杉醇）无明显协同作用:联合给药组3（先给予紫杉醇再给予TRAIL）可见协同作用,选择联合给药组3给药方案进行流式细胞仪检测。Annexin V-FITC/PI双染法检测发现紫杉醇与TRAIL联合较单药组可诱导更多的MCF-7乳腺癌细胞凋亡;空白对照组、紫杉醇（0.5μM×48h）组、TRAIL（0.5μM×24h）组、联合给药（紫杉醇作用24h后加入TRAIL继续作用24h,两药终浓度均为0.50μM）组的凋亡率分别为（7.56±2.23）%,（22.6±2.44）%,（12.36±0.47）%,（61.56±5.52）%。PI法检测发现,TRAIL组与空白对照组细胞周期分布比较差异无统计学意义（P＞0.05）,TRAIL不影响细胞周期分布;紫杉醇与TRAIL联合给药组与紫杉醇组比较细胞周期差别无统计学意义（P＞0.05）。RT-PCR证实在mRNA水平,紫杉醇可诱导MCF-7乳腺癌细胞DR5表达水平上调,而对DR4表达水平无明显影响。结论:MCF-7乳腺癌细胞系对紫杉醇敏感,但对TRAIL敏感性差;紫杉醇与TRAIL联合可见协同作用;诱导凋亡是协同抑制肿瘤细胞的重要方式;TRAIL无明显的细胞周期阻滞作用,并且不影响紫杉醇对细胞周期的阻滞作用;协同机制可能与紫杉醇诱导DR5的表达上调有关。紫杉醇与TRAIL联合给药方式可对下一步体内动物实验提供理论依据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 紫杉醇增强TRAIL诱导MCF-7乳腺癌细胞系凋亡机制研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• TRAIL及其受体在乳腺癌中的最新研究进展
• 综述参考文献
• 致谢