生物防治用途芽孢杆菌对水产条件致病菌抑制作用与对中华绒螯蟹、日本沼虾及中华鳖保护效果的评价

论文题目: 生物防治用途芽孢杆菌对水产条件致病菌抑制作用与对中华绒螯蟹、日本沼虾及中华鳖保护效果的评价

论文类型: 博士论文

论文专业: 微生物学

作者: 吴惠仙

导师: 冯明光

关键词: 芽孢杆菌,益生菌,拮抗菌,嗜水气单胞菌,温和气单胞菌,水产病原菌,中华绒鳌蟹,日本沼虾,中华鳖,生物测定,时间剂量死亡率模拟,水产养殖保护,微生物防治

文献来源: 浙江大学

发表年度: 2005

论文摘要: 芽孢杆菌Bacillus作为一类重要的生防细菌,在禽畜的生物防治中已获得广泛研究和应用,但在水产养殖,尤其是淡水渔业中才刚起步,对其筛选、效用评价都尚缺规范和标准。本研究以广泛存在于淡水中的条件致病菌——气单胞菌为对象,进行了七株芽孢杆菌的拮抗性筛选试验,优化了当选Bs01菌株的培养和发酵条件,并就芽孢菌培养物对中华绒螯蟹Eirocheir sinensis大眼幼体、日本沼虾Macrobrachium nipponnensic、中华鳖Trionyx sinensis等水产动物进行了较深入的室内生物测定和养殖保护效果评价,以期推动我国生防菌剂在淡水养殖业的应用。 基于拮抗性测定的菌株筛选和培养条件优化 以实验室分离获得的七株芽孢杆菌对普遍存在于各种养殖水体的三株条件致病的气单胞菌进行平板拮抗测试,均表现显著抗菌效应。对所试三株病原菌的总抑制效果以Bs01菌株最佳,24 h抑菌环平均直径为14.6f10.7～21.3)mm:Bs03菌株次之,抑菌环为12.9(10.7～17.2)mm;Bs04和Bs05菌株的抑菌效果略低于Bs03;而其余3株芽孢菌的抑菌环平均直径仅为8.5～9.5 mm,显著低于其他菌株。而不同气单胞菌株对芽孢菌的敏感性也表现差异,以嗜水气单胞菌Aeromonashydrophila CL99817菌株对供试芽孢菌最为敏感(抑菌环平均达14.9 mm),而温和气单胞菌A.sobria TL97424菌株和嗜水气单胞菌QXS-1菌株的敏感性相对较弱(抑菌环均值小于10.0 mm)。芽孢杆菌Bs01对病菌的拮抗效应并不完全取决于菌群浓度本身,其发酵液中的代谢产物也具有显著的拮抗效果,去除Bs01菌液中的活菌,其上清液仍对CL99817菌株表现较强的抑制作用,在常温中性条件下,发酵液上清对该病菌的抑制效果可达85%以上。在对Bs01菌株培养条件的优化试验中,pH、装量、温度和养分都能影响发酵液菌群浓度,以pH 7.0最适宜菌株生长,培养24 h后的活菌量达21.6×1 O~8CFU/ml,是pH 4.5条件下生长量(O.58×10~8CFU/ml)的40余倍,比pH 5.5和8.5下的生长量高出3倍左右:最适装量和培养温度分别为40%和35℃:而基础肉汤培养液中添加0.5%葡萄糖是芽孢杆菌Bs01菌株的适宜培养基。 芽孢杆菌对中华绒蟹蟹大眼幼体的保护作用评价采用在养殖水体中接菌的方法,设置3个剂量处理、1个生防菌单独处理、1个嗜水气单胞菌CL998 17单独接种处理及1个清水空白对照,接种剂量规范为单位体积水体所含的菌落形成单位即活菌数(CFLUml),4次重复,每重复包括20只大眼幼体。结果表明,纯病原菌处理和清水对

论文目录:

中文摘要

1 养殖水体益生菌研究现状与文献述评

1.1 水生益生菌概念与特征

1.1.1 水生益生菌的概念发展

1.1.2 水生益生菌特征

1.2 益生菌在水产养殖中的应用研究

1.2.1 益生菌与水产病害的生物控制

1.2.1.1 鱼类病害控制

1.2.1.2 虾蟹病害控制

1.2.1.3 贝类病害控制

1.2.1.4 活体饵料养殖

1.2.2 益生菌与养殖水体的水质调节

1.2.2.1 光合细菌菌剂

1.2.2.2 化能自养、化能异养菌菌剂

1.2.3 益生菌作为营养调节和健康增强剂

1.3 益生菌的作用机理

1.3.1 产生抑菌物质

1.3.2 竞争能源营养或粘附位点

1.3.3 增强机体免疫力

1.3.4 改善水质

1.3.5 营养作用

1.4 水生益生菌的主要类群

1.4.1 乳酸菌

1.4.2 芽孢杆菌

1.4.3 酵母菌

1.4.4 假单胞菌

1.4.5 弧菌

1.4.6 其它益生菌

1.5 益生菌群的影响因子

1.5.1 食物

1.5.2 环境因子

1.5.3 胁迫因子

1.5.4 特殊物质的影响

1.6 水产动物益生菌研究存在的问题与展望

1.6.1 菌种筛选

1.6.2 益生菌作用机理

1.6.3 益生菌的维护与保存

1.6.4 益生菌的施用技术和安全性

1.7 本研究的内容与目的

2 芽孢杆菌对致病性气单胞菌的拮抗测试

2.1 材料和方法

2.1.1 供试菌株及菌液制备

2.1.2 基于拮抗性测定的菌株筛选

2.1.1 芽孢杆菌的培养条件优化

2.1.4 液培芽孢杆菌对病原菌拮抗效应的测定

2.1.5 液培芽孢杆菌代谢物对病原菌拮抗效应的测定

2.2 结果与分析

2.2.1 七株芽孢杆菌的抑菌效果

2.2.2 芽孢杆菌Bs01的培养条件

2.2.3 液培芽孢杆菌的病原菌拮抗效应

2.2.4 芽孢杆菌代谢产物的病原菌拮抗效应

2.3 讨论

3 芽孢杆菌对中华绒螯蟹幼体变态发育的作用评价

3.1 材料与方法

3.1.1 供试菌株及菌剂生产

3.1.2 供试河蟹幼体

3.1.3 生物测定

3.1.4 数据分析

3.2 结果与分析

3.2.1 幼体死亡趋势和生防效果分析

3.2.2 对发育蜕皮效果影响

3.3 讨论

4 芽孢杆菌对日本沼虾气单胞菌烂鳃病的保护作用评价

4.1 材料和方法

4.1.1 供试菌株及动物

4.1.2 生物测定

4.1.3 组织病理学观察

4.1.4 数据分析

4.2 结果与分析

4.2.1 日本沼虾发病死亡趋势

4.2.2 组织病理变化

4.2.3 拮抗性芽孢杆菌的护虾效果模拟

4.3 讨论

5 芽孢杆菌制剂对中华鳖养殖保护的效果评价

5.1 材料与方法

5.1.1 菌种来源与菌剂制备

5.1.2 养殖保护试验

5.1.3 水质指标监测

5.1.4 鳖体调查

5.1.5 数据分析

5.2 结果与分析

5.2.1 Bs01发酵生产与抑菌效果

5.2.2 试验期间水体理化特征变化

5.2.3 鳖群生物量和摄食量变化

5.2.4 综合保护效果

5.3 讨论

6 问题与讨论

参考文献

英文摘要

附：在读期间已发表的研究论文

发布时间: 2005-10-10

参考文献

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• [2].日本沼虾（Macrobrachium nipponense）卵黄蛋白原代谢相关基因的克隆和表达研究[D]. 赵卫红.华东师范大学2011
• [3].日本沼虾（Macrobrachium nipponense）幼虾的铜营养生理研究[D]. 孔有琴.华东师范大学2014
• [4].日本沼虾雌性性早熟相关基因的筛选、克隆、表达与功能分析[D]. 江红霞.西北农林科技大学2017
• [5].日本沼虾（Macrobrachium nipponense）卵子和胚胎发育相关基因的克隆与表达研究[D]. 张凤英.华东师范大学2011
• [6].日本沼虾卵巢表达序列标签分析及生殖相关基因的克隆与表达[D]. 吴萍.华东师范大学2009
• [7].十足目甲壳动物精子发生及顶体反应过程中碱性蛋白和乙酰化H4蛋白的变化[D]. 葛少钦.河北大学2008

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• [7].一株对虾肠道益生菌的筛选及其作用机理和应用效果的研究[D]. 张玲.中国海洋大学2007
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