乳糖酶基因在毕赤酵母中的表达鉴定及发酵工艺的优化

论文摘要

β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶（β-D-galactoside galactohydrolase, EC 3.2.1.23）通常被称为乳糖酶（Lactase）,主要应用在生产低乳糖乳制品以及缓解乳糖吸收不良和乳糖不耐受的问题。但由于目前乳糖酶产量低,销售价格过高,应用成本昂贵,还未得到广泛推广。而基因工程技术的发展为乳糖酶提供了有效的途径。本实验主要构建了乳糖酶基因真核重组表达载体,在毕赤酵母中进行了表达,并对乳糖酶发酵的各种条件进行了摸索以及对发酵液进行了后期处理。实验结果表明:乳糖酶发酵的最佳pH为5.2,温度为30℃,甲醇最终流加速度控制在1.6～3.3之间,溶氧处于20～40%之间,最终测得乳糖酶的活力为7800U/mL。而发酵液最终选择截留分子量为20kD的超滤膜进行浓缩,这样,既不损失过多的蛋白,又会除去过多的杂质。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 真核基因表达系统
• 1.3 重组酵母菌的高密度发酵表达
• 1.4 膜分离技术
• 1.5 论文研究的目的和内容
• 第二章 乳糖酶基因真核重组表达载体的构建
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 乳糖酶基因在毕赤酵母中的表达
• 2.4 表达乳糖酶的转化子的筛选
• 2.5 乳糖酶基因真核重组表达载体的构建结果分析
• 2.6 讨论
• 第三章 重组毕赤酵母阳性转化子的分子检测
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果分析
• 3.4 讨论
• 第四章 乳糖酶发酵工艺的摸索
• 4.1 材料
• 4.2 实验方法
• 4.3 发酵条件的控制
• 4.4 结果分析
• 4.5 发酵讨论
• 第五章 发酵液后处理
• 5.1 材料
• 5.2 乳糖酶发酵液超滤操作
• 5.3 膜的清洗
• 5.4 结果分析
• 5.5 两种膜清洗结果
• 5.6 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献