尼古丁刺激DCs抗肿瘤机制及肿瘤微环境DCs失能研究

论文摘要

树突状细胞（dendritic cells, DCs）是机体最为重要的抗原递呈细胞,其介导产生的抗原特异性CTL是机体抗肿瘤免疫的主要机制,因此DCs的功能状态直接影响肿瘤免疫治疗的效果,也可能与肿瘤在机体内的免疫逃避密切相关。为探讨尼古丁刺激未成熟DCs （immature DCs, imDCs）抗肿瘤机制和肿瘤细胞对imDCs功能状态的影响,imDCs先以尼古丁刺激或与表达肿瘤特异性抗原的小鼠淋巴瘤细胞EG7、表达肿瘤相关抗原的小鼠黑色素瘤细胞B16和小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外直接共培养,次以流式细胞术检测imDCs的表面分子表达情况、吞噬能力及imDCs所介导的抗原特异性淋巴细胞增殖能力,再以ELISA、ELISPOT分别检测imDCs所介导抗原特异性淋巴细胞增殖反应中细胞因子IL-12分泌、抗原特异性CTL增殖分化情况,最后以表达肿瘤特异性抗原之小鼠淋巴瘤EG7细胞、表达肿瘤相关抗原之小鼠淋巴瘤EL4、肺癌LLC、肝癌Hepa 1-6细胞荷瘤小鼠,并经腹腔转输尼古丁刺激联合肿瘤抗原负载之imDCs,检验尼古丁刺激imDCs的抗肿瘤效果。结果显示:尼古丁刺激不但可明显增加imDCs CD80、CD86、CD40、CD54等表面分子和趋化因子受体CCR7表达,而且也明显增强imDCs对抗原的吞噬能力;尼古丁刺激也明显增强imDCs所介导的抗原特异性淋巴细胞增殖、IL-12分泌、CTL增殖分化能力;尤为重要的是,小鼠荷瘤实验证实,尼古丁刺激imDCs体内转输不但对表达肿瘤特异性抗原的淋巴瘤有预防和和治疗效果,而且也可用于表达肿瘤相关抗原的小鼠淋巴瘤、肺癌、肝癌的预防和治疗。肿瘤细胞-imDCs共培养不但显著降低imDCs表面分子CD80、CD54、CD11b、CD11a及MHC II类分子表达,而且也降低imDCs所介导的抗原特异性淋巴细胞增殖、IL-12分泌及CTL增殖分化能力。上述结果提示:尼古丁刺激能明显改善imDCs所介导的抗原特异性CTL增殖的能力,尼古丁刺激imDCs具有明显的抗肿瘤效应,尼古丁刺激imDCs可望成为肿瘤免疫治疗的有效策略。肿瘤细胞与imDCs共培养可直接损害imDCs所介导的抗原特异性CTL增殖的能力,可能是肿瘤逃避机体免疫打击的机制之一。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 尼古丁体外刺激增强树突状细胞所介导抗肿瘤效应研究
• 1. 前言
• 2. 方法
• 2.1 试剂
• 2.2 设备
• 2.3 动物
• 2.4 细胞系
• 2.5 骨髓来源DCs的诱导
• 2.6 DCs的尼古丁刺激
• 2.7 细胞凋亡检测
• 2.8 肿瘤细胞溶解物制备
• 2.9 流式细胞胞内染色
• 2.10 流式细胞分析术
• 2.11 细胞吞噬功能检测
• 2.12 DCs介导抗原特异性淋巴细胞增殖实验
• 2.13 IL-12细胞因子检测
• 2.14 IFN-γELISPOT检测
• 2.15 BrdU掺入法检测细胞增殖实验
• 2.16 CTL杀伤肿瘤细胞需要抗原特异性CTL实验
• 2.17 淋巴瘤模型预防性肿瘤保护实验
• 2.18 淋巴瘤模型治疗性肿瘤保护试验
• 2.19 肺癌LLC肿瘤模型预防性肿瘤保护实验
• 2.20 肺癌LLC肿瘤模型治疗性肿瘤保护实验
• 2.21 肝癌Hepa1-6肿瘤模型预防性肿瘤保护实验
• 2.22 肝癌Hepa1-6肿瘤模型治疗性肿瘤保护实验
• 2.23 尼古丁腹腔直接注射治疗肿瘤实验
• 2.24 统计分析
• 3. 结果
• 3.1 α7 nAchR组成性表达于DCs表面，并受尼古丁刺激而表达上调
• 3.2 尼古丁剂量依赖性的诱导im DCs凋亡
• 3.3 尼古丁促进imDCs表达表面共刺激分子和趋化因子受体
• 3.4 尼古丁增加im DCs共刺激分子表达的作用可被筒箭毒硷所拮抗
• 3.5 尼古丁刺激不增加maDCs表面分子表达
• 3.6 尼古丁刺激可促进im DCs介导的T细胞增殖和IL-12分泌
• 3.7 尼古丁刺激增强DCs介导CTL增殖分化能力
• 3.8 CTL杀伤肿瘤细胞具有抗原特异性
• 3.9 尼古丁刺激im DCs体内转输对淋巴瘤形成有预防作用
• 3.10 尼古丁刺激imDCs体内转输对淋巴瘤成瘤有治疗作用
• 3.11 尼古丁刺激增强DCs介导的肺癌LLC抗原特异性淋巴细胞增殖反应
• 3.12 尼古丁刺激im DCs体内转输对肺癌LLC形成有预防作用
• 3.13 尼古丁刺激imDCs体内转输对肺癌LLC荷瘤小鼠有治疗作用
• 3.14 尼古丁刺激增强DCs介导的Hepa 1-6抗原特异性TH 1免疫反应
• 3.15 尼古丁刺激im DCs体内转输对肝癌Hepa 1-6形成有预防作用
• 3.16 尼古丁刺激im DCs体内转输对肝癌Hepa 1-6荷瘤小鼠有治疗作用
• 3.17 尼古丁体内直接注射无抗肿瘤效应
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 6. 参考文献
• 第二部分 体外模拟肿瘤微环境中树突状细胞失能研究
• 1. 前言
• 2. 方法
• 2.1 试剂
• 2.2 设备
• 2.3 动物
• 2.4 细胞系
• 2.5 肿瘤细胞溶解物制备
• 2.6 骨髓来源DCs的诱导
• 2.7 肿瘤细胞-DCs共培养
• 2.8 流式细胞分析术
• 2.9 抗原特异性淋巴细胞增殖实验
• 2.10 IL-12细胞因子检测
• 2.11 IFN-γELISPOT 检测
• 2.12 统计分析
• 3. 结果
• 3.1 TSA肿瘤细胞-DCs共培养下调DCs表面分子表达
• 3.2 TAA肿瘤细胞-DCs共培养下调DCs表面分子表达
• 3.3 肿瘤细胞-DCs共培养降低DCs介导抗原特异性T细胞增殖能力
• 3.4 肿瘤细胞-DCs共培养显著降低DCs介导TH1 T细胞增殖能力
• 3.5 肿瘤细胞-DCs共培养降低DCs介导抗原特异性CTL分化增殖能力
• 4. 讨论
• 5. 小结
• 6. 参考文献
• 第三部分 尼古丁对免疫细胞功能影响研究进展（综述）
• 1. 尼古丁对单核-巨噬细胞功能影响
• 2. 尼古丁对树突状细胞功能的影响
• 3. 尼古丁对 T 淋巴细胞功能的影响
• 4. 尼古丁对 B 淋巴细胞功能的影响
• 5. 烟草成分不等同于区别于尼古丁
• 6. 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文及成果