产生物碱和石杉碱甲石杉科植物内生真菌的研究

论文摘要

从3种石杉科植物华南马尾杉、有柄马尾杉及蛇足石杉的不同组织器官中分离获得127株内生真菌。运用已构建的菌种发酵及生物碱筛选条件,从127株内生真菌中筛选出28株可能产生物碱的内生真菌。以28株可能产生物碱的内生真菌为出发菌株,通过乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选模型,从中筛选出10株产乙酰胆碱酯酶抑制剂的内生真菌。运用溴甲酚绿酸性染料法分析表明,不同菌株发酵液中生物碱的含量不同,其中以菌株YS-02的吸光值最大,YS-13次之。在此基础上,结合HPLC法及LC-MS法,从中筛选出2株产生与宿主相同的活性成分石杉碱甲的内生真菌YS-02和YS-13,其产量分别为26.4μg/L和21.0μg/L,经形态学和rDNA-ITS序列分析,初步鉴定YS-02菌为炭角菌目（Xylariales）内生真菌,YS-13为纤姿拟青霉（Paecilonmyces tennis）,这两株菌发酵产石杉碱甲尚属首次报道。通过自动生物发酵罐培养技术完成了纤姿拟青霉YS-13的扩大培养的初步研究,发酵产物分析表明纤姿拟青霉YS-13经发酵罐扩大培养可产石杉碱甲,其产量为20.0μg/L。并获得了纤姿拟青霉YS-13发酵生长过程曲线的相关参数。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 中文文摘
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 前言
• 1.1.1 乙酰胆碱酯酶的作用功效
• 1.1.2 乙酰胆碱酯酶抑制剂分析检测方法
• 1.2 微生物来源的乙酰胆碱酯酶抑制剂
• 1.2.1 微生物来源的生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂
• 1.2.2 微生物来源的萜类乙酰胆碱酯酶抑制剂
• 1.2.3 微生物来源的其它类型乙酰胆碱酯酶抑制剂
• 1.3 产乙酰胆碱酯酶抑制活性化合物的微生物种类
• 1.4 立题依据和意义
• 第二章 产生物碱类AChEI内生真菌的分离及筛选
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 华南马尾杉、有柄马尾杉、蛇足石杉内生真菌分离
• 2.3.2 产生物碱的内生真菌的筛选
• 2.3.3 产乙酰胆碱酯酶抑制剂的内生真菌的筛选
• 2.4 讨论
• 第三章 产石杉碱甲蛇足石杉内生炭角菌YS-02的初步研究
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 内生真菌的摇瓶培养
• 3.2.2 发酵液的制备
• 3.2.3 总生物碱的测定
• 3.2.4 产物提取和分离
• 3.2.5 高效液相色谱（HPLC-UV）分析
• 3.2.6 菌株的形态鉴定
• 3.2.7 菌株的分子生物学鉴定
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 内生真菌发酵液中总生物碱产量
• 3.3.2 菌株YS-02发酵产生石杉碱甲
• 3.3.3 菌株YS-02的初步鉴定
• 3.4 讨论
• 第四章 产石杉碱甲蛇足石杉内生纤姿拟青霉YS-13的研究
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 主要仪器及药品
• 4.2.2 培养基
• 4.2.3 内生真菌YS-13的摇瓶培养
• 4.2.4 发酵产物的制备及分离
• 4.2.5 发酵产物的HPLC检测
• 4.2.6 发酵产物的UPLC-MS检测
• 4.2.7 菌株的形态鉴定
• 4.2.8 菌株的分子生物学鉴定
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 内生真菌YS-13发酵液提取物的TLC测定
• 4.3.2 内生真菌YS-13发酵液提取物的HPLC测定
• 4.3.3 内生真菌YS-13发酵液提取物的UPLC-MS测定
• 4.3.4 内生真菌YS-13形态学鉴定
• 4.3.5 内生真菌YS-13 ITS序列分析
• 4.4 讨论
• 第五章 纤姿拟青霉YS-13自动生物发酵罐扩大培养的初步研究
• 5.1 前言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 材料
• 5.2.2 方法
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 纤姿拟青霉YS-13自动生物发酵罐扩大培养过程
• 5.3.2 发酵液中石杉碱甲的检测
• 5.3.3 乙酰胆碱酯酶抑制活性的检测
• 5.4 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历