论文摘要
目的:建立犬肾动脉损伤动物模型的制作方法,以及该方法的具体操作过程;通过基因涂布导管球囊转染肾动脉内膜以找出血管系统基因转移的有效途径及方法;观察VEGF基因转染肾动脉内膜后的表达以及对肾动脉内膜损伤后的治疗效果,以获得VEGF基因治疗血管成形术后再狭窄的基础研究的资料,为临床应用基因治疗方法预防再狭窄打下理论基础。 方法:（1） 利用分子生物学技术,将构建的pcD2/VEGF121真核表达质粒及pcD2空载质粒转化大肠杆XL1-Blue,扩增转化菌,碱裂解法大量提取质粒,PEG8000纯化,酶切后经琼脂糖凝胶电泳鉴定,PCR扩增目的基因片段测定碱基序列。（2） 杂种犬14只采用自身对照的方法将左右肾动脉随机分为治疗侧和对照侧。用介入的方法先行双侧肾动脉造影,然后将PTCA球囊送入肾动脉中段加压并拉伤动脉内膜,反复五次,再将涂布pcD2/VEGF121质粒及pcD2空载质粒的球囊分别导入治疗侧及对照侧损伤段动脉加压维持5分钟,以使基因转染动脉内膜。手术完毕的犬送回动物房观察并继续饲养。分别于术后1周、6周及10周将术后的犬行肾动脉造影后处死,取损伤段肾动脉,制成病理切片进行HE染色及免疫组织化学染色,观察肾动脉内膜的变化和VEGF蛋白的表达,在电镜下观察动脉内膜的超微结构变化,以判断VEGF基因对犬肾动脉损伤后的治疗效果。 结果:（1） 应用上述方法可从每批400ml菌液中提取纯化出3.0mg的pcD2VEGF121真核表达质粒或pcD2空载质粒,紫外吸收比值A260/A280为1.8-2.0。经双酶切的pcD2VEGF121质粒电泳后可见一564bp的目的基因条带,PCR扩增后测序结果与VEGF121基因序列完全一致。（2） 14只犬中有11只完成了实验,3只死于急性肾功
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标签：血管内皮生长因子论文; 基因治疗论文; 肾动脉论文;