BAG-1在急性白血病中的表达及其与BCL-2、BAX的相关性研究

论文摘要

背景与目的急性白血病是造血细胞恶性克隆性疾病，其显著特征是细胞过度增殖和凋亡受抑，多种癌基因、抑癌基因及其相关基因功能异常，引起其相应蛋白的变化，导致细胞周期紊乱，细胞恶性增殖，凋亡受阻，促进了白血病的发生发展。凋亡在癌形成中起着重要作用，并受几种基因的调节。位于9号染色体上的抗凋亡基因BAG-1（即Bcl-2结合抗凋亡基因）是1995年从鼠细胞中克隆出来。已经发现抗凋亡蛋白BAG-1在人类多种癌细胞中高表达，尤其是白血病、乳腺癌、前列腺癌和结肠癌。BAG-1蛋白有四种亚型，即p50（BAG-1L）、p46（BAG-1M）、p33（BAG-1S）和p29，它们是由BAG-1mRNA的不同起始密码开始翻译得到的。BAG-1蛋白在结构上有BAG结构域、泛素样结构域、核定位序列和TXSEEX重复序列。四种BAG-1亚型在共同的C末段的BAG-1结构域可以与Bcl-2、Hsp70和Raf-1相互作用；共有的泛素样结构域可以与蛋白酶体结合并靶向分子伴侣蛋白Hsp70／Hsc70从而调节蛋白质的降解；N末段似乎在BAG-1与核激素受体的结合方面起着重要作用。因此，BAG-1蛋白可能通过与其它蛋白（如Bcl-2蛋白、热休克蛋白、蛋白激酶、核激素受体等）相互作用来抑制凋亡；通过Hsp70／Hsc70途径、信号转导途径、转录途径、凋亡途径和蛋白质降解途径等在肿瘤的形成和进展中起重要作用。Bcl-2基因位于18号染色体上，首先是在带有t（14；18）染色体的滤泡性淋巴瘤中发现的。Bcl-2基因家族在凋亡中起着重要作用，抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax同属Bcl-2基因家族。BAG-1是一个抗凋亡蛋白，它不仅有独立的抗凋亡作用，而且可以增强Bcl-2的抗凋亡活性。本实验采用免疫细胞化学法检测BAG-1、Bcl-2以及Bax蛋白在初治急性白血病患者及完全缓解后患者骨髓单个核细胞中的表达及它们的相关性，探讨其在初治急性白血病中的作用。材料与方法1．研究对象：（1）初治急性白血病组：共收集标本54例，其中男性32例，女性22例，年龄10-75岁（中位年龄35岁）。将全部初治急性白血病患者分为两组：①急性髓系白血病AML)33例，其中M02例，M12例，M216例，M35例，M43例，M53例，M61例，M71例；②急性淋巴细胞白血病（ALL）21例。所有急性白血病患者均依据FAB分型诊断标准划分。（2）完全缓解病人30例，为初治组完全缓解后标本。（3）对照组为非恶性血液病骨髓正常者。所有观察对象均取自于2006年5月至12月郑州大学第一附属医院就诊患者。2．标本处理：化疗前采集患者骨髓和对照者骨髓1ml，分离单个核细胞，制备细胞滴片，采用免疫细胞化学法染色检测BAG-1、Bcl-2和Bax蛋白在初治AL（Acute leukemia）、AL-CR及正常对照者骨髓细胞中的表达。3．数据统计：实验数据用SPSS10.0软件进行统计学处理，BAG-1抗原、Bcl-2抗原和Bax抗原阳性率比较采用X2检验，变量间的相关分析应用Spearman等级相关分析，以α=0.05为检验水准。结果1．BAG-1在正常人骨髓标本中不表达或呈微弱表达。在初治AL患者骨髓单个核细胞中66.7％呈现细胞核或细胞浆的阳性和（或）强阳性表达，其中AML阳性率为63.6％，ALL阳性率为71.4％，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。在AL-CR中阳性率为13.3％，其中AML-CR阳性率为5.3％，ALL-CR阳性率为27.3％，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。初治组与正常对照组（阳性率为5.3％），初治组与AL-CR组之间差异有显著统计学意义（P＜0.01），AL-CR组与对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），且初治AML与AML-CR之间、初治ALL与ALL-CR之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。2．Bcl-2在正常人骨髓标本中不表达或微弱表达。在初治AL患者骨髓单个核细胞中55.6％呈现细胞浆或细胞膜的阳性和（或）强阳性表达，其中AML的阳性率为54.5％，ALL的阳性率为57.1％，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。在AL-CR中阳性率为10.0％，其中AML-CR阳性率为5.3％，ALL-CR阳性率为27.3％，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。初治组与正常对照组（阳性率为10.5％），初治组与AL-CR组之间差异有显著统计学意义（P＜0.01），AL-CR组与对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05），且初治AML与AML-CR之间、初治ALL与ALL-CR之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。3．Bax在正常人骨髓标本中呈微弱表达。在初治AL患者骨髓单个核细胞中29.6％呈阳性和（或）强阳性表达，其中AML的阳性率为36.4％，ALL的阳性率为19.0％，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。在AL-CR中阳性率为40.0％，其中AML-CR阳性率为42.1％，ALL-CR阳性率为36.4％，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。初治组与正常对照组（阳性率为15.8％），初治组与AL-CR组，AL-CR组与正常对照组，初治AML与AML-CR，初治ALL与ALL-CR之间差异均无统计学意义（P＞0.05）4．根据阳性细胞积分分别将BAG-1、Bcl-2和Bax分为高表达组（积分≧4分）和低表达组（＜4分），分析与临床特征的关系：BAG-1、Bcl-2及Bax表达水平与患者年龄、性别、诊断时外周血白细胞数以及髓外浸润无明显相关关系（P＞0.05），但BAG-1高表达组完全缓解（CR）率低于低表达组CR率，差异有显著性（P＜0.05）；Bcl-2高表达组CR率低于低表达组CR率，差异有显著性（P＜0.05）；Bax高表达组CR率高于低表达组CR率，差异有显著性（P＜0.05）。5．相关性分析显示BAG-1与Bcl-2、Bax分别呈正相关（r=0.515，P＜0.05）和负相关（r=-0.313，P＜0.05）关系。结论1．BAG-1和Bcl-2在初治AML和ALL患者中的表达均显著高于正常对照组以及完全缓解组，且BAG-1高表达组CR率低于低表达组，Bcl-2高表达组CR率低于低表达组，说明BAG-1和Bcl-2表达增高可能不同程度地影响了急性白血病的发生和恶性进展，可作为判断急性白血病预后的监测指标。2．BAG-1与Bcl-2呈正相关，提示BAG-1过表达可促进Bcl-2的表达，增强Bcl-2的抗凋亡活性。3．BAG-1与Bax呈负相关，提示两者在凋亡调节中作用相反。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分
• BAG-1在急性白血病中的表达及其与BCL-2、BAX的相关性研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述部分
• 抗凋亡蛋白BAG-1与人类肿瘤研究进展
• 参考文献
• 英文缩略词索引
• 致谢