论文摘要
骨的吸收与重建是一个重要且复杂的生命过程，而在其过程中常伴有多种偶联及信号传导机制。目前越来越多的学者立足于EphB4-ephrinB2介导的双向信号传导在骨稳态中的作用。而牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）作为牙周病致病菌的主要毒力因子，在导致牙槽骨局部骨稳态的失衡而致其骨吸收方面起非常重要的作用。但目前有关Pg-LPS对EphB4-ephrinB2受体配体家族作用的研究较少。为探讨牙槽骨吸收的关键因子脂多糖对成骨细胞-破骨细胞间的EphB4-ephrinB2双向信号传导通路作用，本实验拟在体外建立小鼠颌骨成骨细胞-破骨细胞共育体系，采用RT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法，观察脂多糖介导下破骨细胞和成骨细胞间EphB4-ephrinB2信号分子在基因水平和蛋白水平表达的特点，阐明EphB4-ephrinB2双向信号通路调控下引起牙槽骨局部骨稳态失衡的分子机制，将为牙周病防治提供新思路。主要得出以下结论：1.经破骨细胞细胞液诱导4-5天后RAW264.7单核/巨噬细胞细胞系表达ephrinB2配体蛋白；2.75ng/ml LPS对成骨细胞-破骨细胞间的EphB4-ephrinB2双向传导信号中的正向信号传导有促进作用；3.75ng/ml LPS对成骨细胞-破骨细胞间的EphB4-ephrinB2双向传导信号中的负向信号传导无明显作用或轻微抑制作用。并验证以下结论：1.可通过骨组织块贴壁法联合酶消化法由新生小鼠下颌骨中提取出成骨细胞；2.经过破骨细胞诱导液诱导RAW264.7单核/巨噬细胞细胞系可得到大量成熟破骨细胞。
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前言中文摘要Abstract目录英文缩写词表第一章 绪论1.1 Eph-ephrin 受体配体家族及其所介导的双向信号传导通路1.1.1 Eph-ephrin 受体配体家族1.1.2 Eph-ephrin 信号传导模式1.2 Eph-ephrin 受体配体家族在骨稳态中的作用1.2.1 骨稳态1.2.2 Eph-ephrin 受体配体家族在骨稳态中的作用1.3 牙龈卟啉单胞菌脂多糖1.4 牙龈卟啉单胞菌脂多糖与骨代谢1.5 立题意义1.6 综述第二章 小鼠下颌骨成骨细胞的提取及鉴定2.1 实验材料与方法2.1.1 主要设备及试剂2.1.2 实验方法及操作步骤2.2 实验结果2.2.1 原代新生小鼠下颌骨成骨细胞的形态2.2.2 成骨细胞的鉴定2.2.3 不同浓度 LPS 对小鼠颌骨成骨细胞增殖的影响第三章 破骨细胞的获得与鉴定及小鼠成骨细胞-破骨细胞共育体的建立3.1 实验材料3.1.1 主要仪器及试剂3.1.2 实验方法及操作步骤3.2 实验结果3.2.1 倒置显微镜下观察3.2.2 破骨细胞 TRAP 染色结果第四章 在基因水平检测 LPS 对小鼠成骨细胞-破骨细胞间EphB4-ephrinB2 双向传导信号的影响4.1 实验材料及方法4.1.1 实验材料及设备4.1.2 实验方法4.2 实验结果4.2.1 RT-PCR 实验结果结果4.2.2 Realtime-PCR 实验结果第五章 在蛋白水平检测 LPS 对小鼠成骨细胞-破骨细胞间EphB4-ephrinB2 双向传导信号的影响5.1 Western Blot5.1.1 实验仪器及试剂5.1.2 实验方法及操作步骤5.2 免疫荧光单染5.2.1 主要实验仪器及试剂5.2.2 实验方法5.3 免疫荧光双染5.3.1 主要实验仪器及试剂5.3.2 实验方法5.4 实验结果5.4.1 Western Blotting 检测未经诱导的 RAW264.7 细胞与诱导后的 RAW264.7 细胞 ephrinB2 蛋白的表达5.4.2 免疫荧光检测未经诱导的 RAW264.7 细胞与诱导后的RAW264.7 细胞 ephrinB2 蛋白的表达5.4.3 Western Blotting 检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体 EphB4 表达的影响5.4.4 免疫荧光检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体EphB4 表达的影响5.4.5 Western Blotting 检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体 ephrinB2 表达的影响5.4.6 免疫荧光检测 LPS 对成骨细胞-破骨细胞直接共育体ephrinB2 表达的影响5.5 小结第六章 讨论6.1 实验方法6.1.1 新生小鼠下颌骨成骨细胞的提取6.1.2 破骨细胞的诱导6.2 LPS 对成骨细胞-破骨细胞间 EphB4 受体的促进作用6.3 LPS 对成骨细胞-破骨细胞间 ephrinB2 受体的作用第七章 结论参考文献作者简介及在学期间所取得的科研成果致谢
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牙龈卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞—破骨细胞间EphB4-ephrinB2双向传导信号的影响
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