栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒垂直传播途径的研究

论文摘要

栉孔扇贝“急性病毒性坏死病毒”(Acute Viral Necrotic Virus; AVNV)已被证实为是一种对养殖栉孔扇贝危害极大的病原体,开展其垂直传播途径的探索对于养殖生产中的该疾病的预防与控制、健康养殖模式的建立和健康苗种的培育具有重要的理论和实践意义。鉴于目前栉孔扇贝苗种主要来源于养殖海区半人工采苗的野生苗,仅凭栉孔扇贝繁殖季节对产卵场AVNV的调查检测,难以辨别亲贝、卵、幼体、稚贝的一一对应关系。于是,本文通过室内人工育苗的方法人为控制亲本和下一代的对应关系,同时,应用建立的间接酶联免疫吸附法对通过室内人工育苗得到的样品和贝类人工育苗场收集的样品进行大批量的定性检测,应用电镜技术和间接免疫荧光技术对栉孔扇贝的亲贝卵巢、卵、受精卵和发育各期的幼体进行定位检测,从这两方面验证该病毒是否存在垂直传播途径。2006年10月和2007年5月开展了2个批次的室内人工育苗,将亲贝各放在一独立育苗水体内产卵、孵化,并进行幼体培育。从40个独立育苗水体中,采获亲贝、卵各23个家系样品,受精卵、D形幼虫、壳顶幼虫各12个家系样品,眼点幼虫2个家系样品。2007年4月3日至20日,从贝类人工育苗场内成功采集到栉孔扇贝亲贝、卵、受精卵等各期幼体。利用已建立的AVNV间接ELISA法检测体系,对采集到的栉孔扇贝亲贝、卵和各期幼体进行检测,探讨其是否存在垂直传播的可能性。检测结果显示:亲贝家系样品的性腺中可以检测到病毒,而卵、受精卵、D形幼虫、壳顶幼虫、眼点幼虫的家系样品中均未检测到病毒。由此可以判断,栉孔扇贝AVNV垂直传播途径的可能性不大。为了进一步证实AVNV间接ELISA法的检测结果,利用间接免疫荧光技术对攻毒后栉孔扇贝的亲贝卵巢进行检测。同时利用电镜技术对发病疫区的栉孔扇贝亲贝卵巢和室内人工育苗的亲贝卵巢以及各期幼体进行观察。结果发现:在栉孔扇贝的生殖腺内发现了病毒,但是病毒的感染部位主要分布在生殖腺小管的外膜中,而卵原细胞是由生殖小管的内生殖上皮产生的。由此可以判断,病毒粒子并不能感染卵细胞。而且在扇贝的各期幼体电镜超薄切片中也未发现病毒。这三种不同的检测技术的检测结果可以证明:AVNV可以感染宿主生殖腺结缔组织的间质细胞,但不能通过生殖活动感染卵细胞,由此推断AVNV不存在垂直传播途径的可能性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1. 栉孔扇贝大规模死亡病原—AVNV 的研究进展
• 2. 栉孔扇贝的生物学习性
• 第二章 栉孔扇贝室内人工单独繁育和样品采集
• 1. 材料及方法
• 2. 实验结果
• 3. 结果讨论
• 第三章 AVNV 垂直传播途径的研究1
• 1. 材料与方法
• 1.1 感染试验用扇贝及日常管理
• 1.2 毒种处理
• 1.3 毒种注射感染
• 1.4 石蜡包埋组织切片的制备
• 1.5 电镜超薄切片的制备
• 1.6 间接免疫荧光法检测病毒
• 2. 实验结果
• 2.1 透投射电镜显微观察
• 2.2 间接免疫荧光检测
• 3. 实验讨论
• 第四章 AVNV 垂直传播途径的研究2
• 1. 材料与方法
• 2. 试验结果
• 3. 实验讨论
• 附录
• 参考文献
• 致谢