论文摘要
SYS330是一种新的人工合成可口服的小分子酪氨酸激酶抑制剂，属于苯胺喹唑啉类药物，目前尚处于非临床研究阶段。本文旨在利用Caco-2细胞模型和大鼠在体单向肠灌流模型研究SYS330小肠吸收转运的机理；建立SYS330的HPLC测定方法，了解其基本理化稳定性；并建立其在Caco-2细胞模型和大鼠在体单向肠灌流模型中的HPLC测定方法，对SYS330的系统的非临床药代动力学研究对其进一步研究和开发将起着重要的作用。本文的主要实验结果如下：1 SYS330的检测方法的建立及其理化稳定性研究采用SYS330的HPLC法建立了测定SYS330的色谱条件如下，色谱柱：HypersilC18 BDS（200mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈：0.1mol／L乙酸铵（40∶60），0.03％TFA；流速：1.0mL／min；检测波长：248nm；柱温：30℃；灵敏度：0.01AUFS；进样量：10μL。日内、目间精密度RSD％均在2％以下，准确度均在99％以上。进一步考察了SYS330的理化稳定性，在碱性条件、4℃及其以下贮存SYS330相对稳定，可贮存30天。反复冻融3次对其稳定性无影响。2 SYS330对Caco-2细胞的毒性研究采用MTT比色法研究SYS330对Caco-2细胞的毒性。实验结果表明，小于30μg／mL的SYS330溶液对细胞没有毒性；而大于30μg／mL的SYS330溶液对细胞呈现毒性。3 Caco-2细胞模型的建立与确证通过测定Caco-2细胞单分子层的跨膜电阻（TEER）来判断模型是否成功建立。结果表明在本实验室的培养条件下，经过21天培养分化后，Caco-2细胞分化形成了具有细胞极性的单分子层结构，跨膜电阻大于300Ω·cm2，符合作为药物小肠吸收转运的体外实验模型的要求。4 SYS330在Caco-2细胞模型中吸收转运机制的研究采用Caco-2细胞模型来研究SYS330的细胞吸收转运动力学。本章考察了pH、浓度、ATP能量抑制剂、钾-钠泵抑制剂、葡萄糖转运载体抑制剂、表面活性剂、P-gp抑制剂、MRP1和MRP2抑制剂以及细胞内吞抑制剂等对SYS330的转运吸收和分泌的影响。结果总结如下：1)SYS330主要以被动扩散的方式转运吸收，药物的AP-BL表观渗透系数Papp为（1.061±0.012）×10-5cm／s；2)在转运过程中受介质pH的影响，酸性条件下可增加药物的吸收转运；3)药物经跨细胞转运，受到强烈的细胞内吞作用，显著降低了药物的吸收转运；4)在转运过程中可能受到P-gp等小肠外排蛋白的外排作用，限制了药物的吸收。5 SYS330在大鼠在体单向肠灌流-肠系膜静脉插管模型中吸收机制的研究采用大鼠在体单向肠灌流法与肠系膜静脉插管模型相结合研究了SYS330在大鼠小肠的吸收机制及ATP能量抑制剂、P-gp抑制剂、MRP1和MRP2抑制剂对其吸收的影响。结果显示，SYS330在小肠内的吸收机制属于被动吸收；肠管通透率Plume和血管通透率Pblood分别约为（3.100±0.040）×10-4cm／s和（1.600±0.025）×10-5cm／s；SYS330很可能为P-gp的底物，维拉帕米可抑制其外排作用，从而增加药物吸收。