论文题目: 细胞因子对HIV-1疫苗DNA prime/MVA boost的加强作用
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学和分子生物学
作者: 姜春来
导师: 李惟,孔维
关键词: 疫苗,细胞因子佐剂,重组病毒疫苗,疫苗,细胞毒性,细胞,酶联免疫斑点法,细胞增殖,疫苗初次免疫,加强免疫,病毒样颗粒
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 只有疫苗才能有效的控制艾滋病的流行。但传统的疫苗方案对HIV-1 来说并不可行,减毒活疫苗存在安全性的隐患;而灭活疫苗和亚单位疫苗又不能引起足够强的细胞免疫应答。在美国和泰国联合进行的艾滋病疫苗三期临床试验的失败也提示我们能同时诱导有效的细胞免疫和体液免疫才是艾滋病疫苗的目标。为了产生更好的细胞免疫应答,近期进入临床试验的疫苗多采用DNA疫苗或重组病毒疫苗。虽然DNA 疫苗可以引起细胞免疫,并具备生产方便,易于保存等优点,但其引起的免疫强度不够也限制了其更广泛的应用。目前主要采取两种方法增加其免疫强度:1)采用DNA 疫苗初免(prime)后用重组病毒疫苗加强免疫(boost)。此种免疫方案已在HIV-1,疟疾等疫苗中进行人体观察并得到令人满意的结果;2)应用免疫佐剂(如细胞因子)与DNA 疫苗共注射,也可达到效果。本实验以小鼠为动物模型,利用鼠的细胞因子质粒与HIV-1 DNA 疫苗共注射,然后以重组痘病毒疫苗(MVA)加强免疫。考察不同细胞因子或其组合对HIV-1 DNA 疫苗的加强作用。结果表明:1)以IL-2质粒与HIV-1 DNA 疫苗共注射小鼠,产生的细胞免疫强度高于以IL-2 蛋白与DNA 疫苗共注射所产生的;2)以IL-15,IL-18 和IFN-γ等细胞因子质粒分别与HIV-1 DNA 疫苗共注射小鼠,产生的免疫应答比单独使用DNA 疫苗的免疫应答强;3)以GM-CSF+IFN-γ和GM-CSF+IL-2 两种细胞因子组合与HIV-1 DNA 疫苗共注射小鼠引起的免疫应答比由其它细胞因子组合产生的要强;4)以MVA 先加强免疫后以病毒样颗粒(VLP)再加强免疫(re-boost)的免疫程序产生的免疫应答强于其它免疫程序所产生的免疫应答。
论文目录:
第一章 前言
一、艾滋病疫苗的研究现状
1.HIV 病毒概述
1.1. HIV 流行情况
1.2 HIV-1 的基因组结构
1.3 HIV 病毒的复制周期
1.4 HIV 病毒的分型
2. HIV 疫苗研究现状、趋势和临床试验情况
2.1 HIV 疫苗的可行性
2.2 成功HIV 疫苗的标准
2.3 HIV 疫苗的研究现状
2.4 提高免疫应答的方法
2.5 HIV 疫苗临床研究一览表
二、细胞因子的功能及作为佐剂的研究进展
1. 细胞因子概述
2. 细胞因子在核酸疫苗中的免疫佐剂效应
3. 小结
三、本论文的设计思想
第二章 材料和方法
第一部分 HIV-1 DNA 疫苗的构建及研究
一、中国HIV-1 病毒流行株的确定
二、HIV-1 结构蛋白的抗原修饰
三、HIV-1 DNA 疫苗的构建、鉴定
四、HIV-1 DNA 疫苗在真核细胞中的表达分析
五、质粒大量提取与定量
第二部分 重组痘苗病毒的构建与研究
一、重组痘苗病毒的构建
二、重组痘苗M-GPE 抗原体外表达鉴定
三、滴度试验
第三部分 细胞因子质粒的构建与表达
一、细胞因子真核表达质粒的构建
二、细胞因子表达质粒在真核细胞中的表达
三、细胞因子的生物学活性测定
四、质粒大规模提取
第四部分 病毒样颗粒的表达、纯化和定量
一、转染
二、VLP 的鉴定
三、VLP 的纯化
四、VLP蛋白浓度的测定
第五部分 细胞因子对 HIV-1 疫苗免疫应答的影响
一、比较IL-2 蛋白与IL-2 质粒在HIV-1 疫苗免疫应答中的区别
二、比较不同的细胞因子对HIV 疫苗的免疫应答的影响
三、比较不同的细胞因子组合对HIV 疫苗的免疫应答的影响
四、以MVA 和VLP 作为疫苗,进行两次加强免疫,考察不同免疫程序对HIV 疫苗的免疫应答的影响
第三章 结果与讨论
第一部分 DNA 疫苗的构建
一、B/C 亚型HIV-1 基因组全序列分析
二、HIV-1结构蛋白基因的修饰与表达蛋白的抗原性分析
三、DNA疫苗抗原性分析
第二部分 重组痘苗病毒的构建、表达及鉴定
一、重组穿梭质粒pSC11-GPE 的鉴定
二、重组痘病毒M-GPE 的克隆筛选
三、重组痘病毒M-GPE 插入序列的鉴定
四、重组痘病毒M-GPE 抗原性研究
五、滴度试验结果
六、小结
第三部分 细胞因子真核表达质粒的构建、表达及鉴定
一、细胞因子真核表达质粒的构建
二、细胞因子质粒表达蛋白的鉴定
三、细胞因子质粒表达蛋白的活性鉴定
四、小结
第四部分 病毒样颗粒的表达、纯化和定量
一、病毒样颗粒(VLP)的表达
二、病毒样颗粒(VLP)的纯化
三、病毒样颗粒(VLP)的定量
四、小结
第五部分 细胞因子蛋白与质粒对 HIV-1 疫苗免疫应答的比较
一、IL-2 蛋白和IL-2质粒对HIV-1 疫苗体液免疫影响的研究
二、IL-2 蛋白和IL-2质粒对HIV-1 疫苗细胞免疫影响的研究
三、小结
第六部分 不同细胞因子对 HIV-1 疫苗免疫应答的比较
一、不同细胞因子对HIV-1 疫苗体液免疫应答的区别
二、不同细胞因子对HIV-1 疫苗细胞免疫应答的区别
三、小结
第七部分 不同细胞因子组合对 HIV-1 疫苗的免疫应答的协同作用
一、不同细胞因子组合对 HIV-1 疫苗体液免疫的影响
二、不同细胞因子组合对 HIV-1 疫苗细胞免疫的影响
三、小结
第八部分 不同加强免疫程序对疫苗免疫应答的影响
一、不同加强免疫程序对HIV-1 疫苗的体液免疫的影响
二、不同加强免疫程序对HIV-1 疫苗的细胞免疫的影响
三、小结
参考文献
致谢
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英文摘要
作者简历
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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