论文摘要
黄酒是我国的民族特产,被视为养生保健佳品,对心血管疾病等有很好的疗效,但是缺乏实验支持。本研究以黄酒中的活性多肽为研究对象,研究了活性多肽的分离纯化方法及血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性的测定。采用大孔树脂对黄酒中的多肽进行初步分离,从5种大孔树脂中筛选出适合分离多肽的树脂,探究该树脂的最佳吸附和分离条件,结果表明:DA201-C树脂对多肽吸附量大,解吸率高,该大孔树脂富集黄酒中多肽的最佳条件为:上样流速0.5BV/h,上样浓度为3.2mg/ml,洗脱溶剂为70%的乙醇,洗脱流速为1BV/h。DA201-C树脂对多肽的等温吸附在25℃时,能很好的符合Langmuir吸附等温式和Freundlich方程,两者的相关系数分别为0.998和0.993,此时最大吸附量Qm为40mg/g,Kl为0.04。大孔树脂吸附前后的样品经高效液相色谱分析,结果显示其纯度大大增加,由6.8%提高到66.7%,纯化倍数为9.8。采用高速逆流色谱和反相层析法,对多肽粗品进行进一步分离纯化。通过对各溶剂系统分层时间、上下相体积比、分配系数的比较及分析型HSCCC的对溶剂体系的快速筛选,最终确定了甲基叔丁基醚:乙腈:水2:2:3体系,加入的溶剂对是三氟乙酸和氨水。制备型HSCCC在制备样品的过程中,对主机转速、循环水浴温度以及上样浓度进行了优化,最佳操作参数为转速900r/min,温度25℃、上样浓度10mg/ml、流动相流速为1.8ml/min。对HSCCC分离出的组分P1进行SOURCE 5RPC反相层析,得到组分P1-1与P1-2。经进一步分析显示P1-1为单一峰,氨基酸组成为Thr、Ser、Gly、Ile和Phe,其中Ile和Phe对ACE抑制肽的生物活性有重要作用。采用高效液相色谱法,检测了组分P1的体外ACE抑制活性,结果显示组分P1有较强的ACE抑制活性,其IC50为0.61mg/ml。
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摘要ABSTRACT第一章 绪论1.1 黄酒的概况1.1.1 黄酒的基本营养成分1.1.2 黄酒的功能性成分1.2 酿造酒中活性多肽的研究1.2.1 葡萄酒相关研究进展1.2.2 黄酒中活性肽的相关研究1.2.3 活性肽的分离纯化1.2.4 ACE 抑制肽概述1.3 高速逆流色谱概述1.3.1 高速逆流色谱的工作原理及特点1.3.2 pH-区带逆流色谱的原理1.3.3 pH-区带逆流色谱的应用1.4 研究的目的、意义及内容1.4.1 研究的目的及意义1.4.2 研究内容第二章 大孔树脂吸附分离黄酒中的活性肽2.1 材料2.1.1 主要实验材料2.1.2 主要仪器与设备2.2 实验方法2.2.1 树脂预处理及水分的测定2.2.2 样品粗液的制备及成分的测定2.2.3 树脂的筛选2.2.4 DA201-C 树脂的静态吸附实验2.2.5 洗脱剂浓度的选择2.2.6 DA201-C 树脂吸附热力学实验及上样量的确定2.2.7 动态吸附及洗脱2.3 结果与分析2.3.1 成分测定结果2.3.2 五种树脂吸附解吸效果2.3.3 DA201-C 大孔树脂的静态吸附曲线2.3.4 不同浓度乙醇解吸效果的确定2.3.5 DA201-C 大孔树脂吸附力学2.3.6 洗脱流速的确定2.3.7 DA201-C 大孔树脂吸附前后的液相图谱比较2.4 本章小结第三章 黄酒中的活性肽的分离纯化3.1 材料3.1.1 主要实验材料3.1.2 主要仪器与设备3.2 实验方法3.2.1 多肽粗品的制备3.2.2 高速逆流色谱溶剂系统的筛选3.2.3 RP-HPLC 扫描3.2.4 溶剂系统参数的的测定3.2.5 分析性 HSCCC 的应用3.2.6 制备型逆流色谱的条件选择3.2.7 HELP 反相层析3.2.8 氨基酸组成测定3.3 结果与分析3.3.1 多肽粗品的高效液相色谱图谱3.3.2 各溶剂系统的测定参数3.3.3 分析性 HSCCC 的结果3.3.4 制备型 HSCCC 转速的确定3.3.5 水浴温度的确定3.3.6 流速的确定3.3.7 上样浓度的确定3.3.8 反相层析图谱3.3.9 氨基酸组成分析3.4 本章小结第四章 黄酒中 ACE 抑制肽的活性测定4.1 材料4.1.1 主要实验材料4.1.2 主要仪器与设备4.2 实验方法4.2.1 试剂的配制4.2.2 马尿酸标准曲线4.2.3 体外 ACE 抑制活性实验方法4.2.4 RP-HPLC 法检测4.3 结果与分析4.3.1 马尿酸标准曲线及图谱4.3.2 体外降血压活性实验4.4 本章小结主要结论有待解决的问题参考文献致谢
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