导读:本文包含了基因构建论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:敖汉细毛羊,成纤维细胞,质粒构建,BMP4基因转染
基因构建论文文献综述
张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,柳楠[1]（2019）在《敖汉细毛羊BMP4基因质粒的构建及在成纤维细胞中表达量的研究》一文中研究指出旨在构建敖汉细毛羊BMP4基因的质粒及转染成纤维细胞后研究基因表达量的变化。以30日龄的敖汉细毛羊胚胎为研究对象。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中BMP4基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得BMP4基因片段、将得到的BMP4基因连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-BMP4重组质粒并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3.1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将重组pcDNA3.1-BMP4表达载体转染成纤维细胞,后检测BMP4基因在mRNA和蛋白水平上表达量的变化。结果显示:pcDNA3.1-BMP4构建成功后转染成纤维细胞BMP4基因的mRNA和蛋白表达量均显着上升,且转染组的表达量极显着地高于对照组(P<0.01)。成功构建了敖汉细毛羊BMP4基因的质粒,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年06期）
赵靖悦,龚林,雷娜娜,陈由强,何文锦[2]（2019）在《叁角褐指藻PtCryP基因的克隆及敲除载体构建》一文中研究指出文章旨在获得叁角褐指藻中隐花色素CryP的全长序列并进行生物信息分析,且利用CRISPR/Cas9系统的pKS diaCas-sgRNA质粒,通过质粒酶切、引物退火、连接重组质粒,成功构建了PtCryP叁角褐指藻的敲除载体,并通过DNA测序确定插入了sgRNA序列。PtCryP基因的开放阅读框全长为1575 bp,编码524个氨基酸,预测的等电点8.30,理论分子量58.98 kD。通过结构域分析,隐花色素蛋白的典型结构域存在于PtCryP蛋白中。本研究首次构建了叁角褐指藻PtCryP的CRISPR/Cas9敲除载体,为下一步叁角褐指藻CryP的表达和功能研究奠定基础。(本文来源于《福建轻纺》期刊2019年12期）
白光兴,王萍,冯亚星,张德福,陈亚华[3]（2019）在《斯氏油脂酵母基因组Fosmid文库的构建及降解百草枯氮次级代谢相关基因的筛选》一文中研究指出斯氏油脂酵母在以百草枯作为唯一氮源的培养基中能降解百草枯,但其机制尚不清楚。为分离鉴定斯氏油脂酵母中降解百草枯的相关基因,本研究通过构建斯氏油脂酵母的Fosmid文库,用百草枯作为筛选标记,成功筛选到7个百草枯抗性的大肠杆菌克隆。对阳性克隆插入片段进行了测序分析,并对真核基因进行注释。结果在插入片段中发现了nmrA基因及氮代谢相关基因,nmrA是真菌在限氮的条件下才激活的氮代谢相关基因,能调控激活下游的次级氮代谢基因家族,分解那些不常见的氮源。这提示斯氏油脂酵母可能也具有氮的次级代谢调控机制,在百草枯作为唯一氮源的环境下斯氏油脂酵母能激活次级氮代谢相关基因,分解代谢百草枯。(本文来源于《工业微生物》期刊2019年06期）
王伟伟,凌晓霏,陆沁,柳鹏飞,张金稳[4]（2019）在《中华紫胶虫FAD基因RNA干扰载体构建与功能初步分析》一文中研究指出[目的]引入细菌表达dsRNA干扰系统对中华紫胶虫FAD基因进行RNA干扰,通过检测干扰后FAD基因表达量与个体泌胶量动态变化,对FAD基因功能进行初步分析,为验证紫胶合成相关基因功能提供科学基础。[方法]中华紫胶虫FAD基因和L4440载体经双酶切之后,利用T4连接酶连接,构建FAD-L4440重组质粒,并转入HT115感受态细胞中,IPTG诱导表达dsRNA后,通过虫体涂抹法将dsRNA转染到紫胶虫体内。用RT-qPCR检测干扰后FAD基因的表达量并测定干扰后个体泌胶量的变化。[结果]RNA干扰后FAD基因表达量明显降低,其中,以低浓度菌液处理后12 h和中浓度菌液处理后24 h相对于对照组有显着差异,分别降低了90.90%和86.52%,中浓度在72 h时干扰效率高于其他两个组,个体泌胶量与对照组比较有显着下降。[结论]本研究构建了中华紫胶虫FAD基因的RNA干扰载体,在基因功能验证中引入了细菌表达dsRNA的RNAi系统,使用虫体涂抹法将其导入虫体内引起FAD基因表达量与紫胶虫个体泌胶量显着下降,为RNAi转染过程中不适用注射法、喂食等转染方法的昆虫提供技术参考,为后续解析紫胶合成的分子机理提供技术基础与科学依据。(本文来源于《林业科学研究》期刊2019年06期）
杨杰,李兰,戴莉,张江国,莫善明[5]（2019）在《利用引物探针序列构建转基因马铃薯检测阳性重组质粒及其验证》一文中研究指出[目的]通过将特定转基因检测方法引物和探针序列重组拼接,并将重组序列连接至质粒中,验证其作为转基因检测阳性对照的可行性。[方法]通过搭桥PCR和全基因合成的方法制备阳性重组序列,验证阳性重组序列作为阳性对照品的可行性与阳性重组质粒的均一性、稳定性。[结果]通过将引物探针序列顺序拼接构建得到的阳性重组质粒的性状均一,在4和-20℃条件下均能稳定产生阳性结果。[结论]该种阳性重组质粒的构建方法能够满足转基因成分检测方法中阳性对照品的要求。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2019年23期）
蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳[6]（2019）在《靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建》一文中研究指出性反转是指动物表现的性别特征与其应有的性别相反的现象。性反转小鼠可作为动物模型研究哺乳动物性别分化机制、性别控制技术以及研究人类性别连锁疾病发病机理和防治方法。已有研究证明,在胚胎期敲除雄性小鼠的Y染色体将获得XO基因型的性反转小鼠。本研究设计了6个不同的sgRNA,使共能介导Cas9蛋白作用于小鼠Y染色体上的多拷贝基因—Rbmy(RNA-binding motif gene),通过比较不同的sgRNA介导Cas9对靶序列的切割效率,最终筛选出一条能够高效介导Cas9靶向Rbmy基因的sgRNA6,该sgRNA6在体外切割效率达到100%,细胞内切割突变效率为15.4%,利用该sgRNA6构建了靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体。利用该载体转染小鼠雄性睾丸间质瘤细胞,成功获得了XO基因型的单细胞克隆团。本研究所构建的靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体可用于小鼠胚胎注射,为获得Y染色体敲除的XO型性反转小鼠模型提供基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年12期）
刘洋[7]（2019）在《结合信号放大技术的病毒基因SERS传感器的构建及应用研究》一文中研究指出病毒是一种个体微小,结构简单,必须寄生在活细胞内的非细胞型生物,只含脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA),以复制的方式增殖。病毒可以感染所有种类的生命,埃博拉病毒病、艾滋病、登革出血热、严重急性呼吸综合征和禽流感等许多严重危害人类生命的疾病均是由病毒引起的。快速诊断病毒类型和感染情况,能够有效减少病毒性传染疾病的大面积传播与感染,为其预防和控制政策及时提供重要的科学依据。但传统病毒检测方法普遍存在检测条件苛刻、花费昂贵或检测耗时长、灵敏性有待提高等问题,因此亟待开发用于病毒现场快速、高灵敏、特异性的检测技术。近年来,表面增强拉曼散射(SERS)生物传感技术因具有超高的灵敏度和SERS光谱的“指纹”特性,被广泛应用于生物检测和分析。与此同时,越来越多的核酸放大检测技术与生物传感技术相结合,进一步提高了生物传感策略的检测灵敏度。本论文旨在以甲型流感病毒与登革病毒检测为模型,研究并提出结合SERS与核酸放大技术的病毒基因检测策略,开发用于病毒基因检测的高灵敏、特异性SERS传感器。主要研究内容及创新点如下:(1)设计并提出结合SERS和核酸外切酶III辅助DNA循环放大技术的H7N9病毒基因特征片段SERS传感策略甲型流感病毒H7N9是新近发现的高致病性禽流感病毒之一,对公众健康和禽业构成严重威胁。针对H7N9基因特征片段检测需求,设计并提出结合SERS和核酸外切酶III辅助DNA循环放大技术的SERS传感策略,实现了对于H7和N9基因特征片段的联合高灵敏、特异性检测。首先,针对H7和N9基因特征片段,分别设计捕获链(Capture)和替换链(Replace),并基于两组特殊设计的基因序列,分别实现了H7和N9基因片段的核酸外切酶III辅助DNA循环放大;然后,将循环放大产物孵育到银纳米棒阵列活性SERS基片表面,并进一步特异性捕获针对H7和N9检测而特殊设计的探针链(Probe);最后,通过SERS信号的检测,实现了对H7和N9特征基因片段的高灵敏SERS联合检测。在表征传感机理有效性,并优化表面封闭剂巯基己醇(MCH)和核酸外切酶III用量等的基础上,提出了最优的传感策略,得到了H7和N9基因片段在1 fM-100 pM的工作曲线,检测限达到每升几十阿托摩尔水平。该结合核酸外切酶III辅助DNA循环放大技术的SERS传感策略可为H7N9病毒和其他禽流感病毒的检测提供有力的工具。(2)设计并提出用于登革病毒基因检测的无酶双重信号放大SERS传感策略登革病毒在初次感染人类时会引起轻微发热,并有可能发展为更严重的登革热出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS),从而导致死亡。针对DENV基因检测需求,本文设计并提出了结合局域催化发夹组装(LCHA)与杂交链式反应(HCR)两种无酶放大技术的SERS传感策略,实现了对DENV基因特征片段的超灵敏、特异性检测。首先针对DENV基因特征片段,设计一组特定DNA序列,包括两个单链L1和L2,四个发夹结构C1、C2、H1、H2。首先,6种DNA与DENV基因片段在PCR管内进行LCHA辅助DNA循环放大与HCR信号放大过程,再将形成的DNA结构与银纳米棒基底一起孵育,使其捕获到SERS基底上,MCH封闭后测得SERS信号,实现对DENV基因特征片段超灵敏,特异性检测。通过PAGE凝胶电泳与SERS技术表征了传感机理的有效性,并在优化了MCH最佳使用浓度的基础上,得到了DENV基因片段在1 fM-10 nM的工作曲线,检测限达到每升几百阿托摩尔水平。该无酶双重信号放大SERS传感策略为登革病毒的快速准确检测提供了可靠的检测方法。(本文来源于《南京邮电大学》期刊2019-12-09）
赵璐,粘红,韦燕凯,金成成,李娜[8]（2019）在《白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控》一文中研究指出目的探究白细胞介素10(interleutin 10,IL-10)基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)对自体外周血Th17细胞的免疫调控作用。方法构建IL-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells,IL-10-ADSCs)及荧光蛋白标记的兔脂肪来源间充质干细胞(green fluorescent protein-adipose mesenchymal stem cells,GFP-ADSCs),定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)及Western blot检测细胞IL-10基因及蛋白表达水平。分离培养兔泪腺上皮细胞及自体外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立淋巴细胞体外激活共培养体系,分组按PBMCsADSCs为51的比例加入等量ADSCs、IL-10-ADSCs及GFP-ADSCs,同时以等比例的成人真皮成纤维细胞-α作为对照组,Q-PCR检测各组Th17细胞相关基因mRNA表达水平。结果成功构建IL-10-ADSCs和GFP-ADSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达率达80%以上。Q-PCR及Western blot检测结果显示,IL-10-ADSCs组IL-10 mRNA及蛋白表达水平均高于GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,ADSCs组、IL-10-ADSCs组及GFP-ADSCs组均可降低兔外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17及转录因子维甲酸相关孤独受体C mRNA表达水平(均为P<0.05),且IL-10-ADSCs组降低效果显着高于ADSCs组及GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 IL-10-ADSCs可抑制Th17细胞分化相关基因的表达水平,具有抑制Th17细胞分化的潜能。(本文来源于《眼科新进展》期刊2019年12期）
王会峰,赵志军,王燕,吴媛媛,王宁菊[9]（2019）在《稳定敲除CACYBP/SIP基因的MCF-7细胞株的构建及其细胞增殖的变化》一文中研究指出目的利用CRISPR/Cas9系统构建CACYBP-/-乳腺癌MCF-7基因缺陷细胞株,并研究该基因敲除株对细胞增殖能力的影响。方法设计特异sgRNA序列,构建Lenti-CAS9-sgRNA-puro质粒,转染MCF-7细胞,puromycin抗性筛选,Cruiser检测sgRNA活性,极限稀释法筛选单克隆株,Western blot检测CACYBP/SIP蛋白的表达,Brdu和MTT试剂盒检测CACYBP/SIP缺失后细胞增殖能力。结果成功构建Lenti-CAS9-sgRNA-puro质粒,puromycin最佳筛选浓度为0. 9μg/m L,sgRNA1活性最高,获得的单克隆系测序唯一敲除CACYBP/SIP的MCF-7细胞株增殖能力减弱(P<0. 05)。结论敲除CACYBP/SIP的MCF-7细胞株增殖能力减弱。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年12期）
李永慧,苏硕青,李巧玲,吴同垒,张志强[10]（2019）在《肠炎沙门菌pagC基因缺失株构建及其相关生物学特性研究》一文中研究指出目的研究肠炎沙门菌外膜蛋白PagC的生物学功能以及在肠炎沙门菌致病过程中的作用。方法利用λ-Red同源重组系统构建了肠炎沙门菌(C50336)pagC基因缺失突变(C50336Δhtra),在此基础上构建基因回补菌株。测定肠炎沙门菌各菌株在培养基中的生长曲线;利用生化鉴定系统测定各菌株的生化特性;分析肠炎沙门菌各菌株在酸性、碱性和高渗环境下的存活能力;利用K-B纸片法测定肠炎沙门菌各菌株的耐药性。结果成功构建了肠炎沙门菌pagC基因缺失株C50336ΔpagC。生长曲线显示,与野生型菌株和回补菌株相比,C50336ΔpagC缺失株生长速度、生化特性无明显差异,表明pagC不影响肠炎沙门菌的生长特性。应激实验结果显示,pagC基因缺失后,肠炎沙门菌应对酸碱应激和高盐应激能力显着下降,表明pagC影响肠炎沙门菌应激条件下生存。药物敏感性试验结果显示,pagC基因缺失后,肠炎沙门菌对多种抗菌药物敏感性增高,表明pagC参与肠炎沙门菌耐药过程。结论 PagC蛋白与细菌抗环境应激和耐药性相关,为进一步阐释肠炎沙门菌致病机制和耐药机理奠定基础。(本文来源于《中华医院感染学杂志》期刊2019年22期）
基因构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
文章旨在获得叁角褐指藻中隐花色素CryP的全长序列并进行生物信息分析,且利用CRISPR/Cas9系统的pKS diaCas-sgRNA质粒,通过质粒酶切、引物退火、连接重组质粒,成功构建了PtCryP叁角褐指藻的敲除载体,并通过DNA测序确定插入了sgRNA序列。PtCryP基因的开放阅读框全长为1575 bp,编码524个氨基酸,预测的等电点8.30,理论分子量58.98 kD。通过结构域分析,隐花色素蛋白的典型结构域存在于PtCryP蛋白中。本研究首次构建了叁角褐指藻PtCryP的CRISPR/Cas9敲除载体,为下一步叁角褐指藻CryP的表达和功能研究奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因构建论文参考文献
[1].张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,柳楠.敖汉细毛羊BMP4基因质粒的构建及在成纤维细胞中表达量的研究[J].华北农学报.2019
[2].赵靖悦,龚林,雷娜娜,陈由强,何文锦.叁角褐指藻PtCryP基因的克隆及敲除载体构建[J].福建轻纺.2019
[3].白光兴,王萍,冯亚星,张德福,陈亚华.斯氏油脂酵母基因组Fosmid文库的构建及降解百草枯氮次级代谢相关基因的筛选[J].工业微生物.2019
[4].王伟伟,凌晓霏,陆沁,柳鹏飞,张金稳.中华紫胶虫FAD基因RNA干扰载体构建与功能初步分析[J].林业科学研究.2019
[5].杨杰,李兰,戴莉,张江国,莫善明.利用引物探针序列构建转基因马铃薯检测阳性重组质粒及其验证[J].安徽农业科学.2019
[6].蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳.靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建[J].畜牧与兽医.2019
[7].刘洋.结合信号放大技术的病毒基因SERS传感器的构建及应用研究[D].南京邮电大学.2019
[8].赵璐,粘红,韦燕凯,金成成,李娜.白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控[J].眼科新进展.2019
[9].王会峰,赵志军,王燕,吴媛媛,王宁菊.稳定敲除CACYBP/SIP基因的MCF-7细胞株的构建及其细胞增殖的变化[J].基础医学与临床.2019
[10].李永慧,苏硕青,李巧玲,吴同垒,张志强.肠炎沙门菌pagC基因缺失株构建及其相关生物学特性研究[J].中华医院感染学杂志.2019