论文摘要
目的:胶质母细胞瘤是人类颅内恶性程度最高的肿瘤,多发于成年人,好发于40-50岁男性,肿瘤生长迅速,常在白质内呈浸润方式生长。常规的治疗为手术切除为主,术后放疗或合并应用化疗,但由于肿瘤边界不清,术中难以完全清除,一般在8个月后复发,生存时间平均1年左右。基因疗法是一种全新概念的治疗方法,它根据瘤细胞与正常细胞内分子机制的不同而设计选择性的使目的细胞死亡的治疗方法,其中条件复制的基因缺失型溶瘤腺病毒H101（国外同类制剂为Onyx-015或dl1520）是目前研究比较多的基因疗法之一,它根据肿瘤细胞和正常细胞p53途径的不同而设计,切除人类5型腺病毒结合宿主细胞p53蛋白的E1B- 55KD片段,使得这种基因改良腺病毒不能在p53阳性的正常细胞内复制,而能够选择性的在p53途径缺失的肿瘤细胞内复制,并且最终溶解肿瘤细胞并散布子代病毒继续感染其它肿瘤细胞,发挥其“旁观者”效应。目前H101类生物制剂在除外脑部肿瘤的其它体内肿瘤单独或联合放化疗的临床前及临床实验已经开展,包括头颈部肿瘤、口腔癌、消化系统肿瘤、肺癌、前列腺癌等等,都已开展了Ⅰ-Ⅲ期的临床实验,并取得了令人鼓舞的结果。但大多学者对其应用在神经肿瘤领域还是存在质疑,主要原因是H101腺病毒对正常神经元的毒性以及是否会引发由腺病毒所致的脑炎及脑水肿症状。本课题的目的在于检测H101对体外培养的正常的海马神经元的毒性反应及初步检测H101对体外培养的胶质母细胞瘤U251的抑制率。方法:本实验选用的胶质母细胞瘤为p53阴性的U251,由日本细胞库建系并保存,原代培养12天的新生大鼠海马神经元作为正常细胞对照组,海马神经元用神经元特异性MAP-2抗体进行鉴定,分别应用细胞毒性实验（MTT）、细胞病变反应实验（CPE）检测不同滴度的H101对瘤细胞及神经元的抑制率及毒性,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测H101mRNA在不同的时间点（24h、48h、72h）在胶质瘤细胞及神经元内的表达水平,对差异显著性进行T检验。结果: 1. H101病毒在24小时就可以对体外培养的胶质母细胞瘤U251产生抑制作用,加入的病毒滴度越大抑制率越高,并且随着病毒作用时间的延长,细胞病变反应越发明显,H101mRNA的表达呈上升趋势。2. H101病毒不能在体外培养的原代大鼠海马神经元内有效复制,海马神经元不出现细胞病变反应,不同病毒滴度组的海马神经元与对照组相比抑制率没有统计学差异（ P> 0.05）,三个时间点检测不到病毒H101 mRNA的表达。结论:1.溶瘤病毒制剂H101对体外培养的人类胶质母细胞瘤U251存在明显的抑制作用,能够在肿瘤细胞内复制,并最终起到溶瘤作用,并且胶质母细胞瘤U251细胞内病毒的产量随时间的延长而增大。2.溶瘤病毒制剂H101对体外培养的原代大鼠海马神经元没有毒性作用,而且基因学检测腺病毒不能在正常的神经元内复制。