论文摘要
目的:克隆、构建、鉴定重组人促红细胞生成素基因四环素调控真核表达载体;探讨四环素系统对重组人促红细胞生成素基因表达的调控。 方法:以含重组人促红细胞生成素全长cDNA的CHO细胞为模板,通过RT-PCR的方法扩增出重组人促红细胞生成素基因（hEPO）。将其克隆到真核表达载体pTRE2hyg的多克隆位点,构建成pTRE2hyg-EPO,进行酶切及测序鉴定。将pTRE2hyg-EPO及Tet-On质粒转导入SD大鼠骨骼肌细胞,用RT-PCR、Western印迹实验和半固体细胞培养实验检测hEPO基因在大鼠骨骼肌内的表达和蛋白的活性,并观察四环素系统对EPO表达的调控作用。 结果:（1）成功构建了四环素调控真核表达质粒pTRE2hyg-EPO,经测序鉴定与所需EPO基因序列一致。（2）重组人EPO基因可以在大鼠骨骼肌原代细胞中表达,并受四环素调控系统的控制。生成的促红细胞生成素具有生物活性,可明显刺激骨髓红系细胞的生长。 结论:成功构建了四环素调控真核表达载体pTRE2hyg-EPO。在细胞水平四环素系统可控制转导的EPO基因的表达,并且生成有生物活性的促红细胞生成素,达到基因治疗的要求。
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标签：重组人促红细胞生成素基因论文; 肾性贫血论文; 四环素调控系统论文; 基因治疗论文;