病毒抗原蛋白的B细胞表位生物学研究

论文摘要

人体免疫系统的进化同微生物的感染是密切相关的,病毒作为疾病的微型使者,在其中扮演了重要的角色。免疫系统通过非特异性、以及特异性免疫反应,在与病毒相互作用的过程中,不断完善自身的功能以及发挥抗病毒的作用。B淋巴细胞,作为免疫系统中的抗体产生细胞,在机体抗病毒感染中,同T淋巴细胞共同组成了特异性免疫防线;它们的抗感染功能是通过对病毒抗原蛋白的表位识别开始的。同T细胞只识别经MHC分子递呈的线性肽不同,B细胞对抗原表位的识别要更为严格和复杂。B细胞识别抗原蛋白分子上的天然构象表位,并且对表位不同结构的识别,其引起的体液免疫应答在抗病毒感染中的作用也千差万别。根据免疫应答的结果,可以将B细胞表位分为保护性表位以及毒性或限制性表位、免疫优势性表位以及亚优势性表位;根据表位的功能,又可以分为中和、非中和以及感染增强性表位、病理以及自身抗原交叉反应性表位、宿主特异性表位等。对这些表位的分子组成及结构、在体液免疫应答反应中表现的研究,可以进一步提高我们对表位生物学意义的认识,加深对病毒感染过程中抗原性蛋白功能的理解;并为最终解决致病性病毒提供有用的工具和手段。我们选择了两个模型来进行病毒抗原性蛋白的B细胞表位生物学的研究,一是严重急性呼吸器官综合症冠状病毒（SARS-CoV）,另外一个是流行性感冒病毒（Influenza Virus）,将分述如下。在SARS-CoV的感染过程中,有一个特别引人注目的现象:即人体内针对病毒核衣壳蛋白（nucleocapsid protein）的特异性抗体出现的时间早、并且在恢复期病人中持续的时间长。这使我们不禁提出这样的问题:1),这些特异性抗体是由N蛋白的那些表位引发的?2),N蛋白上的不同表位在引发机体的体液免疫应答上各自起什么样的作用?为了回答这些问题,我们首先制备了NP的一组特异性单克隆抗体,用于了解NP上抗原性位点的分布。为了区分出这些抗体特异性表位的结构,我们使用了酵母呈现系统来进行表位作图。酵母作为单细胞真核生物,其优势在于能够尽可能地模拟哺乳动物细胞的蛋白表达功能,保持所表达蛋白的天然构象;并且可以通过流式细胞仪来进行抗原抗体结合的分析。通过B细胞表位生物学的既往研究我们知道,对一个蛋白而言,并不是其上分布的所有表位都是具有免疫原性的。因此,我们第二步制备了N

论文目录

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• 论文正文 病毒抗原蛋白的B 细胞表位生物学研究
• 第1章 SARS-CoV 核衣壳蛋白的抗体表位作图及体液免疫反应性研究
• 1.1 文献综述及前言
• 1.2 实验材料和方法
• 1.2.1 SARS-CoV 病毒株的增殖和细胞培养
• 1.2.2 SARS 恢复期病人血清样本的收集
• 1.2.3 SARS-CoV N 蛋白杂交瘤细胞株的筛选和鉴定
• 1.2.4 SARS-CoV N 蛋白特异性单抗的制备和纯化
• 1.2.5 Western Blot 鉴定N 蛋白单抗
• 1.2.6 Immunofluorescence Assay 鉴定N 蛋白单抗
• 1.2.7 SARS-CoV N 蛋白特异性抗血清的制备
• 1.2.8 N 蛋白的序列分析和表位预测
• 1.2.9 酿酒酵母表达质粒的构建
• 1.2.10 N 蛋白重组子的酵母转化试验
• 1.2.11 酵母表面呈现融合蛋白的诱导表达
• 1.2.12 抗原抗体复合物的荧光标记
• 1.2.13 人血清样本和抗血清的酵母预吸附试验
• 1.3 实验结果
• 1.3.1 SARS-CoV N 蛋白特异性单抗的特性
• 1.3.2 N 蛋白及其截断片段的酵母表面呈现
• 1.3.3 SARS N 蛋白的单克隆抗体表位作图
• 1.3.4 N 蛋白抗体特异性线性和构象性表位的鉴定
• 1.3.5 抗血清筛选位于N 蛋白上的免疫优势性表位
• 1.3.6 SARS 病人血清检测N 蛋白表位特异性免疫应答
• 1.4 讨论
• 1.5 实验图表
• 1.6 参考文献
• 第2章 H5N1禽流感病毒的宿主特异性表位研究
• 2.1 文献综述及前言
• 2.2 实验材料和方法
• 2.2.1 HK486 和SD7 NP 特异性单抗的制备
• 2.2.2 HK486 ANP、BNP、HA、NA 酵母表达质粒的构建
• 2.2.3 HK486 NP 突变体的酵母呈现
• 2.2.4 ANP 及其片段呈现融合蛋白的流式标记
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 H5N1 NP 蛋白片段的诱导表达
• 2.3.2 H5N1 NP 的表位结构的鉴定
• 2.3.3 H5N1 宿主特异性表位的序列分析
• 2.4 讨论
• 2.5 实验图表
• 2.6 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 博士期间发表的学术论文与研究成果