DNA载体pVAX1-IRES和复制型DNA载体pSFVax1-IRES的构建及表达

DNA载体pVAX1-IRES和复制型DNA载体pSFVax1-IRES的构建及表达

论文摘要

二十一世纪,恶性肿瘤将成为威胁人类健康的第一杀手。随着分子生物学、免疫学以及基因技术的不断发展,肿瘤疫苗已经成为一种治疗恶性肿瘤的重要方法。本研究针对DNA疫苗在恶性肿瘤治疗中展现出来的优势,在真核表达载体pVAX1的基础之上,引入了内部核糖体进入位点(IRES)元件,从而构建成功了一种新型DNA疫苗载体pVAX1-IRES。结果显示:在pVAX1-IRES载体中,IRES序列的上游和下游不仅可以分别表达,而且可以同时表达两种不同的外源目的基因。本研究进一步表明,在载体pVAX1-IRES中,IRES上游基因的表达强于下游基因的表达。同时,本研究鉴于塞姆利基森林病毒(SFV)具有“自主复制”的功能,所以在构建好的DNA载体pVAX1-IRES的基础之上,又引入了pSFV1载体的复制酶编码基因nsP1-4,从而构建成了新型复制型DNA疫苗载体pSFVax1-IRES。该载体不仅能够同时表达两种外源基因,而且由于引入了复制酶基因,使得该载体在细胞质中可以进行大量自我复制,因此外源基因可以得到高效表达。这两种新型载体的构建,为研制新型肿瘤疫苗提供了良好的工具。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 引言
  • 第一部分 DNA疫苗载体pVAX1-IRES的构建
  • (一) IRES序列的扩增
  • 材料与方法
  • 结果
  • (二) DNA疫苗载体pVAX1-IRES的构建
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第二部分 DNA疫苗载体pVAX1-IRES的表达
  • (一) DsRed1基因和EGFP基因的扩增
  • 材料与方法
  • 结果
  • (二) pVAX1-IRES-DsRed1、pVAX1-IRES-EGFP、pVAX1-IRES-DsRed1-EGFP的构建
  • 材料与方法
  • 结果
  • (三) pVAX1-IRES-DsRed1、pVAX1-IRES-EGFP、pVAX1-IRES-DsRed1-EGFP的表达
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第三部分 复制型DNA疫苗载体pSFVax1-IRES的构建
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 全文结论
  • 参考文献
  • 在读期间发表的论文
  • 致谢
  • 相关论文文献

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