天然中草药对肥大细胞脱颗粒抑制作用及其机制的研究

论文摘要

本论文广泛选取中医上用于缓解过敏、炎症症状的各味中草药作为研究对象,对其有效成分进行提取并通过体外动物细胞实验模型检测其对肥大细胞脱颗粒反应的抑制效果,筛选得到了土茯苓、芍药、金银花、黄芩、花椒、艾叶、连翘、甘草、地肤子等具有特异性有效抑制肥大细胞脱颗粒反应的天然中草药。其中,土茯苓提取物抑制效率最高（浓度为500μg/ml时,抑制率达到95.63%）,且未见相关报道,具有很高的开发价值。本文通过对土茯苓、芍药、金银花、甘草抑制肥大细胞脱颗粒反应的量-效关系研究,阐明了土茯苓、芍药、金银花、甘草四味中草药用药浓度与药效之间的关系。研究结果表明,土茯苓、芍药、金银花、甘草提取物对肥大细胞脱颗粒反应的半数有效抑制浓度分别为62.5μg/ml、113.8μg/ml、1000μg/ml、1620.4μg/ml。进一步对土茯苓、花椒、芍药的有效成分进行细分,并对其细分后提取部位的药效进行考察,测定了土茯苓、花椒、芍药有效成分的滞留部位及其在提纯后对药效的影响。研究结果表明,土茯苓、花椒、芍药的水提母液50%醇洗液和醇提母液50%醇洗液为其有效成分的主要滞留部位,对肥大细胞脱颗粒反应的抑制率分别为60.99%和66.18%,92.11%和94.44%,94.08%和99.81%。本文对于土茯苓提取物抑制肥大细胞脱颗粒反应的作用机制进行了初步探索,实验结果表明,土茯苓水提母液50%醇洗液和土茯苓醇提母液50%醇洗液对由提高蛋白激酶C活性而诱导的肥大细胞脱颗粒反应无抑制作用。而对于蛋白激酶A活性的研究数据显示,土茯苓水提母液50%醇洗液和土茯苓醇提母液50%醇洗液在抑制肥大细胞脱颗粒反应的同时,确实对蛋白激酶A的活性有一定程度的提高。提示蛋白激酶A可能是土茯苓提取物实现其抑制肥大细胞脱颗粒反应机制的一个作用靶点。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 研究背景
• 1.1 肥大细胞脱颗粒简介
• 1.2 肥大细胞脱颗粒机制的研究进展
• 1.2.1 肥大细胞活化的分子基础
• 1.2.2 肥大细胞脱颗粒反应的分子机制
• 2+/钙调蛋白（calmodlμlin,CaM）蛋白激酶途径'>1.2.2.1 Ca²⁺/钙调蛋白（calmodlμlin,CaM）蛋白激酶途径
• 1.2.2.2 DAG/PKC途径
• 1.2.2.3 PKA途径
• 1.2.2.4 其他可调节途径
• 1.3 抗组胺药物的研究进展
• 1.3.1 抗组胺药的分代
• 1.3.2 抗组胺药的应用前景及其局限性
• 1.4 活化或抑制肥大细胞的天然成分简介
• 1.4.1 激活肥大细胞脱颗粒的天然成分
• 1.4.2 抑制肥大细胞脱颗粒的天然成分
• 1.5 土茯苓、花椒、芍药的化学成分与药理作用研究简介
• 1.5.1 土茯苓的化学成分与药理作用研究
• 1.5.1.1 土茯苓的化学成分研究
• 1.5.1.2 土茯苓的药理作用研究
• 1.5.2 花椒的化学成分与药理作用研究
• 1.5.2.1 花椒的化学成分研究
• 1.5.2.2 花椒的药理作用研究
• 1.5.3 芍药的化学成分与药理作用研究
• 1.5.3.1 芍药的化学成分研究
• 1.5.3.2 芍药的药理作用研究
• 1.6 本课题的研究目的和意义
• 第2章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 中药药材及提取物
• 2.1.3 常用试剂及耗材
• 2.1.4 常用仪器和设备
• 2.2 主要试剂的配制方法
• 2.3 常用实验方法
• 2.3.1 大鼠腹腔肥大细胞的分离和纯化
• 2.3.2 大鼠腹腔肥大细胞纯化后的处理
• 2.3.3 组胺的测定
• 2.3.4 数据的处理与分析
• 第3章 抑制肥大细胞脱颗粒中药的药效研究和筛选
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.3 结果和讨论
• 3.3.1 组胺标准曲线的制作
• 3.3.2 Compound 48/80诱导肥大细胞脱颗粒最适条件的确定
• 3.3.3 抑制肥大细胞脱颗粒中药粗提物的初筛
• 3.3.3.1 蛇床子、地肤子、白藓皮提取物的药效学研究和比较
• 3.3.3.2 金银花、桑白皮、黄芩、丹皮、当归、蛇床子提取物的药效学研究和比较
• 3.3.3.3 苦参、甘草、金银花、芍药、白藓皮、地肤子提取物的药效学研究和比较
• 3.3.3.4 厚朴、啤酒花、麦芽、蛇舌草、花椒、黄柏、百部提取物的药效学研究和比较
• 3.3.3.5 苍术、连翘、艾叶、土茯苓、蒺藜、防风、荆芥、花椒提取物的药效学研究和比较
• 3.3.4 初筛有效粗提物的药效学研究和比较
• 3.3.5 土茯苓、芍药、金银花提取物及甘草提取物A的量-效关系研究
• 3.3.5.1 土茯苓提取物的量-效关系研究
• 3.3.5.2 芍药提取物的量-效关系研究
• 3.3.5.3 金银花提取物的量-效关系研究
• 3.3.5.4 甘草提取物A的量-效关系研究
• 3.3.6 土茯苓、花椒、芍药有效提取部位群的研究
• 3.3.6.1 土茯苓细分后提取部位的药效学研究和比较
• 3.3.6.2 花椒细分后提取部位的药效学研究和比较
• 3.3.6.3 芍药细分后提取部位的药效学研究和比较
• 3.4 小结
• 第4章 土茯苓提取物抑制肥大细胞脱颗粒的药效机制研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 蛋白激酶C通路的研究
• 4.3.1.1 TPA诱导肥大细胞脱颗粒最适条件的确定
• 4.3.1.2 土茯苓提取物最有效浓度的确定
• 4.3.1.3 土茯苓水提母液50%醇洗液抑制TPA诱导肥大细胞脱颗粒的量-效关系研究
• 4.3.1.4 土茯苓醇提母液50%醇洗液抑制TPA诱导肥大细胞脱颗粒的量-效关系研究
• 4.3.2 蛋白激酶A通路的研究
• 4.3.2.1 细胞外组胺量的检测
• 4.3.2.2 细胞内cAMP活性的检测
• 4.4 小结
• 结论与展望
• 参考文献
• 致谢