论文摘要
我们运用一种自己建立的miRNA基因克隆分析方法进行了人胎肝组织中miRNA的克隆过程中意外地克隆到了大量的tRNA半分子（half-tRNA），通过进一步实验发现half-tRNA普遍存在于真核细胞中。那么这些half-tRNA是如何产生的呢?是什么原因导致了细胞内half-tRNA的大量产生呢?为此，我们就这些tRNA半分子（half-tRNA）产生的原因和机制进行了初步的研究。我们以小鼠组织和哺乳动物不同类型的细胞为实验对象，通过选取多种不同tRNA分子的5’端探针进行Northern blot，以及构建血管生成素蛋白的过表达载体、RNA干涉、体外切割等实验手段研究了不同应激条件下half-tRNA的生成，以期揭示half-tRNA产生的原因和机制。本文获得的主要进展有：1．首次在哺乳动物细胞中发现了half-tRNA。2．证实了half-tRNA在哺乳动物细胞中普遍存在。3．初次揭示了细胞：在各种应激条件下可以产生half-tRNA，表明half-tRNA的形成对于细胞应激具有重要的意义，可能是生物进化过程中形成的一种应激反应机制。4．首次证实了血管生成素是导致half-tRNA生成的核酸酶。提出了half-tRNA产生的假设：应激条件刺激细胞→细胞内产生空载tRNA→ANG核酸酶活性增强→细胞内产生half-tRNA→参与细胞应激反应。本研究首次在哺乳动物细胞中发现了half-tRNA，并揭示了half-tRNA产生的原因及其形成机制，这些工作为全面研究half-tRNA生成的机制和生物学功能奠定了良好的基础。