论文摘要
抗菌肽是天然免疫的主要组成部分,是动物体液免疫系统中具有广谱杀菌、抑制病毒、抑杀肿瘤细胞等作用的一类膜活性多肽。抗菌肽因为分子量小而且不具备抗原性、耐热、对原核生物细胞具有很高的生物学活性,而对真核生物的正常细胞没有明显的毒副作用而受到广泛关注。为了避免目的产物对工程菌的毒性作用,保证表达产物的稳定性,可以更简便的获得大量的表达产物以及在后续实验中能有效的对表达产物进行检测,本研究进行了中国鲎抗菌肽TachyplesinⅠ原核表达及其多克隆抗体的制备。本研究从中国鲎抗菌肽真核表达载体pPIC9-KRY中PCR扩增抗菌肽TachyplesinⅠ基因（标记为TPⅠ）,插入pQE-40中,切下带有运载蛋白DHFR的融合蛋白DHFR- TPⅠ,构建到pQE-80L中,构建中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ的大肠杆菌表达系统,表达中国鲎抗菌肽tachyplesinⅠ基因的融合蛋白DHFR-TPⅠ。SDS-PAGE检测表达并优化表达条件;利用改进的透析袋电洗脱回收蛋白的方法纯化表达产物,经体外抑菌活性测定表明,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌具有抑菌作用。利用纯化的蛋白免疫成年獭兔,免疫4次后制备DHFR-TPⅠ的多克隆抗体,间接ELISA检测血清效价,SPSS软件分析融合蛋白DHFR-TPⅠ与DHFR之间的关系,Western-blotting检测表达产物与抗体的特异性。本研究抗菌肽TachyplesinⅠ的原核表达及多抗的制备为以后亲和层析提取中国鲎抗菌肽、建立抗菌肽检测方法、抗菌肽异源表达水平的检测奠定基础。