不同方法生产的牛早期胚胎干扰素-tau基因mRNA表达活性分析

论文摘要

为了探讨体外操作对牛胚胎IFNτ基因的mRNA表达活性的影响。本研究采用原位杂交技术和半定量RT-PCR分析,以牛卵母细胞孤雌发育胚胎、体外受精胚胎、冷冻解冻的体外受精胚胎和体细胞核移植胚胎为材料,研究胚胎细胞IFN-τ mRNA表达情况,结果显示体外操作会影响牛胚胎IFNτ mRNA表达活性。 采用地高辛（digoxigenin,DIG）标记的DNA探针,对体外生产不同日龄（3,4,5,6,7,9d）的牛孤雌发育胚胎、体外受精胚胎和体细胞核移植胚胎细胞中IFN-τ mRNA进行原位杂交,研究不同方法生产的牛胚胎中IFN-τ mRNA表达情况。结果显示,体外受精胚胎在第4天的16-细胞胚胎开始检测到IFN-τ表达;体细胞核移植胚胎在第5天的致密桑椹胚开始表达IFN-τ基因,第7天的表达量明显提高;而孤雌发育胚胎直到第6天的早期囊胚才开始表达。第5天的体细胞核移植胚胎和体外受精胚胎IFN-τ表达量有差异。第7天的体细胞核移植胚胎IFN-τ表达量明显高于孤雌发育胚胎。胚龄相同而发育阶段不同的胚胎其IFN-τ的表达量有差异。 对第7天的牛孤雌发育囊胚、体外受精囊胚、冷冻解冻的体外受精囊胚、体内受精雄性囊胚和体细胞核移植囊胚用酸性Tyrode’s溶液（pH2.5）溶解透明带后,利用半定量RT-PCR方法进行分析,比较不同方法生产的体外胚胎中IFN-τ基因转录水平。结果表明不同胚胎的灰度比值统计学上差异不显著（p>0.05）,但是,体外受精胚胎IFN-τ的表达量要高于体细胞核移植胚胎和孤雌胚胎,冷冻解冻后的体外受精胚胎与新鲜的体外受精胚胎相比IFN-τ的表达量下降。冷冻解冻后的体外受精胚胎IFN-τ表达量高于体内受精雄性胚胎。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 缩略语表
• 第一章 文献综述
• 第一节 探索哺乳动物附植前胚胎发育分子机理的方法
• 第二节 IFN-T研究现状
• 第三节 本研究的目的意义及主要研究内容
• 第二章 牛胚胎IFN-T基因MRNA的原位杂交分析
• 1.引言
• 2.材料与方法
• 3.实验设计
• 4.实验结果
• 5.讨论
• 第三章 IFN-T表达差异的半定量RT-PCR比较
• 1.引言
• 2.材料与方法
• 3.实验设计
• 4.实验结果
• 5.讨论
• 第四章 结论与展望
• 参考文献
• 作者简历
• 致谢