中度嗜盐细菌和极端嗜盐古菌的分离与鉴定

论文摘要

随着近年来对嗜盐菌研究力度的不断加大，不仅分离到越来越多新的菌种，而且随着对嗜盐机理了解的逐渐加深和新菌株特性的不断发现，让我们认识到了嗜盐菌所具有的潜在应用价值。其中能适应较广的盐浓度范围、分布广泛的中度嗜盐细菌和在极端盐浓度下生长的、具有古菌特性的极端嗜盐古菌，分别以各自独具的优势，吸引着人们去分离出更多、更具特色、更有生物技术应用潜力的菌株。本研究是从江苏连云港和山西运城的高盐环境采集样品，进行嗜盐菌的分离和鉴定研究。并对分离到的部分嗜盐菌株进行培养条件的确定、形态观察、生理生化测试，以及基于16S rDNA基因序列的系统发育学分析等对其进行鉴定。本研究共挑选了10株光镜观察形态特殊的紫色中度嗜盐菌株进行了16S rDNA基因测序，通过与GenBank中所有已测的原核生物的16S rDNA序列进行比较，分析研究了它们可能的归属，结果发现：菌株LYG 24、LYG 30、LYG 1可能属于红弧菌属，与Rhodovibriosalinarium关系最近；菌株LYG 4C可能属于Halomonas属；菌株LYG 10和BX 104最类似于Salisaeta longa；菌株LYG 20和LYG 9可能属于碱螺菌属；菌株LYG BX6可能属于Marinobacter菌属；菌株LYG 8018，从系统发育树可以看出，是一个独立的分枝，不属于任何一个菌属，而且和关系最近的Rhodovibrio salinarium菌株的相似性在87 %。对菌株LYG 8018进一步研究，确定其为革兰氏阴性弧菌，最适生长温度为40℃，最适NaCl浓度是12 % （w/v）,最适pH为7.0，过氧化氢酶和氧化酶阳性，硝酸盐还原阳性，主要的醌是Q-10。通过表型特征、生化特征和分子生物学特征，认为菌株LYG 8018可能为中度嗜盐菌Rhodospirillaceae科中新属的一个新种，欲命名为Salinicurvata lianyungangensis gen.nov. sp. nov.。共分离出7株极端嗜盐古菌，对其中的2株形态特殊的菌株进行了16S rDNA测序，与Genbank中的类似序列进行多序列比对，认为菌株DX 110可能属于Halorubrum菌属，与其最近的菌株是Halorubrum lacusprofundi；菌株DX 114从系统发育树上来看，属于一个独立的分枝，不隶属于目前任何一个菌属，并且与最近的菌属Halorubrum之间的相似性在83 %。通过进一步研究确定菌株DX 114为革兰氏阴性杆菌，最适生长温度为40℃，最适NaCl浓度是3.4 M，最适pH为7.5，最适Mg2+浓度是0.4 M。过氧化氢酶和氧化酶阳性，硝酸盐还原阳性。通过表型特征、生化特征、以及分子生物学特征，初步认为菌株DX 114可能为极端嗜盐古菌Halobacteriaceae科中新属的一个新种，欲命名为Haloroseuslianyungangenisis gen. nov., sp.nov..对于从连云港盐池和运城盐湖分离得到的其它130多株菌株，准备通过对它们进行表型筛选，PCR测定其16S rDNA基因序列，并通过测序结果对有研究价值的菌株进行具体的生理生化特征等鉴定，以期能够获得更多有应用价值的嗜盐菌株。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语
• 第1章 绪论
• 1.1 高盐环境的微生物多样性
• 1.2 嗜盐菌的系统发生多样性
• 1.3 嗜盐菌的渗透压适应性
• 1.4 嗜盐菌的代谢多样性
• 1.5 嗜盐菌的分类研究
• 1.5.1 中度嗜盐细菌分类研究的现状
• 1.5.2 极端嗜盐古菌的分类研究现状
• 1.5.3 中度嗜盐细菌和极端嗜盐古菌的生长竞争
• 1.5.4 嗜盐菌的分类学研究方法
• 1.6 嗜盐菌的研究意义
• 第2章 中度嗜盐细菌的分离与鉴定
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 样品采集
• 2.2.2 菌株的分离与培养
• 2.2.3 表型特征
• 2.2.4 化学分类特征
• 2.2.5 基因型特征
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 样品的采集
• 2.3.2 菌株的分离与采集
• 2.3.3 表型特征
• 2.3.4 化学分类特征
• 2.3.5 基因型特征
• 2.3.6 总结
• 第3章 极端嗜盐古菌菌株的分离与鉴定
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 样品的采集
• 3.2.2 菌株的分离与培养
• 3.2.3 表型特征
• 3.2.4 化学分类特征
• 3.2.5 基因型特征
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 样品的采集
• 3.3.2 菌株的分离
• 3.3.3 表型特征
• 3.3.4 化学分类特征
• 3.3.5 基因型特征
• 3.3.6 总结
• 结束语
• 参考文献
• 致谢