CpG ODN对用卵清蛋白致敏以及呼吸道合胞病毒致敏制备的哮喘小鼠动物模型的免疫治疗实验研究

论文摘要

前言:过敏性哮喘是一种炎症性呼吸道疾病,由多种细胞,尤其是肥大细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,巨噬细胞 T 淋巴细胞以及它们的产物参与。这些产物不仅能使气道炎症扩散和超敏反应,而且不断地表现为Th2细胞增多的炎症反应,此反应是由IL-4, , , IL-5 IL-9 IL-13,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的高分泌而诱导的。此外 CD4+细胞,IgE 水平的升高作为包括过敏性哮喘的过敏病理发展过程中的免疫系统失调因素。目前,广泛应用的抗过敏药物是皮质醇激素。尽管类固醇激素可以有效地减轻气道炎症和超敏反应的症状,但它们不能有效地调节成有效地治疗疾病,而且预防哮喘病理发展需要慢性疗法。 前期的研究已经证实,CpG-ODNs 能够有效地把 Th2 细胞免疫应答转化为 Th1 细胞抗炎症免疫应答,以及调节 Th1 细胞的超敏反应,因此作为保证 Th1-Th2 细胞平衡因素的机制。在分子水平上,CpG-ODN基序过诱导 Th1 细胞反应,实现 Th1/Th2 细胞在分子水平上的平衡。Th1 细胞反应是由调节细胞因子如 IL-12,IL-10,肿瘤生长因子-β（TGF-β）和包括其他免疫抑制细胞因子如NK细胞的干扰素的调节性分泌特定的。这种过程能够抑制 Th2 细胞过敏炎症性反应。 然而,最近的研究能够预先用白蛋白致敏,制备噬酸性气道炎症和支气管超敏反应性的哮喘小鼠动物模型。我们致力于比较2CpG-ODNs 单一应用和传统的应用激素对用卵清蛋白致敏和用呼吸道合胞病毒（RSV）致敏制备的两种小鼠哮喘动物模型进行治疗的有效性。目的:本实验研究的设计目的是比较以及分析在以上的用卵清蛋白致敏和用呼吸道合胞病毒（RSV）致敏制备的两种小鼠哮喘动物模型中,CpG-ODNs 和地塞米松（DEX） 对嗜酸性炎症气道高反应,和支气管嗜酸细胞清除的免疫调节有效性。以期建立一种治疗超敏反应的新方法。方法:两个哮喘模型组,即 OVA 组和 RSV 组各 30 只由雌性 SPF级 BALB/C 小鼠组成,每组又分为 3 个亚组,分别由 10 只小鼠组成,即生理盐水组,CpG 治疗组,地塞米松治疗组,OVA 组 RSV 组的每个亚组小鼠分别行腹腔皮下注射 OVA 或 RSV 每周免疫 1 次,共 4 次,然后三次用 OVA 或 RSV 分别缓慢滴入鼻腔以激发小鼠哮喘,制备小鼠哮喘动物模型,分别进行腹腔皮下注射生理盐水（未治疗组）,CpGODN 和地塞米松治疗试验,即三次免疫之后,初次激发后进行每天治疗 2 次,末次激发后进行每天治疗 2 次共 4 次。在 OVA 组和 RSV 组末次激发 24 小时和 48 小时后分别进行摘眼球取全血用 EDTA 抗凝血进行流式细胞仪检测 T 细胞亚群;CD3+,CD4+,CD8+细胞所占百分以及 CD4+/CD8+细胞的比值 。 全血离心后,参照 EL1SA 试剂盒说明书进行检测小鼠外周血 IL-4I,FN-γ和 总 IgE的含量。处死小鼠,取肺组织后,进行肺组织 HE 染色,制备切片于PBS 溶液浸泡 8 分钟后,再用 HE 再染,风干并以 400X 光镜下随机选10 个视野,观察肺组织病理改变,逐个视野观察 EOS 数,计算每个视野的 EOS 平均数的同时,观察固定后的肺组织切片中的炎症细胞。所有数据均 以均值±标准差（ x±s ）的方式表示,统计学处理采用 SPSS 10.0 软件进行方差分析.结果:与未治疗对照组相比,CpGODN 和 地塞米松两治疗组哮喘模型中的肺组织气道炎症和嗜酸性炎症细胞浸润均明显减轻,并诱导血清（p<0.05）CD4+/CD8+比值,IL-4 含量和总 IgE 含量均降低,血清IFN-γ均上升。CpG ODN 与地塞米松两组相比,前者明显降低血清3（p<0.05）CD4+/CD8+比值,CD4+,IL-4 和总 IgE 的含量,并能明显升 高 IFN- γ 。 在 卵 清 蛋 白 致 敏 哮 喘 模 型 组 , IFN- γ 水 平 从34.76±1.51（pg/ml）（OVA-未治疗组）上升至 36.69±1.98 （pg/ml）（地塞米松治疗组）, 49.93±9.18 （pg/ml） （OVA-CpGODN 治疗组）,而在 RSV 致敏哮喘模型组 从 35.05±1.08（pg/ml）（未治疗组） 上升至 47.16±6.87（pg/ml） （地塞米松治疗鼠组）,46.83±8.84（pg/ml） （CpG 治疗治疗鼠组）.两组哮喘模型控制情况比较,CpG 能够明显地导致 IFN-γ的含量增高,而地塞米松没有导致明显地 IFN-γ的增多.CD4+细胞水平从 55.5±5.81%（RSV-未治疗组）降至 48.94±8.08%（RSV-DEX 鼠组）,47.25±3.64%（RSV-CpG 鼠组）;CD4+/CD8+比值由3.53±0.37%（未治疗 OVA 鼠组）降至 2.98±0.29% （OVA-DEX 鼠组）,3.73±0.55%（OVA-CpG 鼠组）,从 3.94±0.59%（RSV 鼠组）降至 3.67±0.33%（RSV-DEX 鼠组）,2.92±0.35%（RSV-CpG 鼠组）。相反,CD4+细胞水平在 CpG 治疗组（48.39±5.13%）和 DEX 治疗组（48.53±3.77%）明显高于（P<0.05）未治疗组（（42.9±5.23%））尽管在各治疗组中的 CD4+细胞水平没有明显的统计性差异（P>0.05）.IL4 水 平 由 106.97±13.40（pg/ml） （OVA 鼠 组 ） 降 低 至89.02±10.11（pg/ml） （OVA-DEX 鼠组）;87.69±13.25（pg/ml）（OVA-CpG 鼠组）,同时,IL4 水平由 110.03±8.65（pg/ml）（未治疗 RSV 鼠组）降低至107.64±10.58（pg/ml）（EDX 治疗 RSV 鼠组）,88.96±9.89%（CpG 治疗 RSV鼠组）。总 IgE 水平由 4.78±1.65（IU/ml）（未治疗 OVA 鼠组）降低至4.69±0.89（IU/ml）（DEX 治疗 OVA 鼠组）,3.52±0.23（IU/ml）(CpG 治疗 OVA鼠?

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 附图
• （九） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 中英文摘要
• （二） 正文
• （三） 参考文献
• 三、致谢