RT-A体外稳定性及其代谢物的蛋白结合率研究

论文摘要

RT-A及其代谢物RT-B为白藜芦醇及其苷（包括虎杖苷）的氧代酸类衍生物,是以天然产物白藜芦醇及其苷（虎杖苷）中的活性成分为母体化合物,进行结构修饰,设计出的对改善心血管功能具有高活性的化合物,为正在研究与开发中的一类候选新药。按照国家一类新药临床前药代动力学研究的有关要求,本文考察了RT-A的体外稳定性,建立了测定血浆样品中RT-B的定量分析方法,并成功的应用此方法测定了RT-B与大鼠血浆蛋白的结合率。通过这些基础试验研究,为该药物的临床应用提供依据。本文采用高效液相色谱法系统地考察了温度和pH对RT-A稳定性的影响及其在大鼠血浆中的稳定性。建立了测定缓冲溶液中RT-A的HPLC法,采用Kromasil C18色谱柱,以甲醇-0.1%乙酸（70:30,v/v）为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长318 nm,柱温40℃。其线性范围为1-80μg/ml（r=0.998 3）,日内和日间精密度（RSD）均小于11%,准确度（RE）均在6.1%之间。测定血浆中RT-A的HPLC法的色谱条件同上,其线性范围为1-40μg/mL（r=0.997 5）,日内和日间精密度（RSD）均小于9.8%,准确度（RE）均在12.5%之间。结果表明,RT-A的稳定性具有pH和温度依赖性。在pH 1.5～pH 7.2的缓冲溶液中,RT-A可以稳定存在,在缓冲溶液（pH 9.5和pH 11.0）中的浓度随着时间延长而下降,其降解符合伪一级动力学,RT-A的降解半衰期分别为3.76和0.30 h,且RT-A在pH 11.0的磷酸盐缓冲液中孵化后检测到大量的RT-B。随着温度的升高,RT-A的稳定性降低,在0,25,34和50℃条件下的半衰期分别为50.2,8.60,5.37和1.54 h。在血浆中RT-A也极不稳定,通过加入酯酶抑制剂NaF增强了其在血浆中的稳定性。本文首次建立了测定血浆样品中RT-B的HPLC法。采用Kromasil C18色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液（28:72,v/v）为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长318 nm,柱温40℃,其线性范围为0.04-10μg/mL（r=0.999 4）,日内和日间精密度（RSD）均小于15%,准确度（RE）均在4.7%之间。本方法简便、准确、重复性好,为测定血浆样品中RT-B提供了定量分析方法。本文采用平衡透析法考察了RT-B与大鼠血浆蛋白的结合率,为临床上RT-B的血药浓度监测和应用提供方法。配制低、中、高3个浓度的含药透析液（1,2和3μg/mL）,每个浓度3样本分析,分别于4,10,24和48 h结束实验,对血浆蛋白透析平衡时间进行了考察,确定24 h为最终的平衡时间。结果表明,低、中、高3种浓度下,RT-B的血浆蛋白结合率分别为（79.2±0.7）%,（80.1±0.9）%和（80.2±0.9）%,RT-B的平均血浆蛋白结合率为（79.8±0.8）%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 白藜芦醇及其氧代酸类衍生物研究概况
• 1.1.1 白藜芦醇
• 1.1.2 RT-A及其代谢物RT-B
• 1.2 立题依据和研究方案
• 第二章 RT-A的体外稳定性研究
• 2.1 实验材料
• 2.2 RT-A在磷酸盐缓冲溶液中的稳定性
• 2.2.1 RT-A定量分析方法的建立
• 2.2.2 不同pH缓冲盐溶液
• 2.2.3 不同温度缓冲盐溶液
• 2.3 RT-A在体外血浆中的稳定性
• 2.3.1 RT-A定量分析方法的建立
• 2.3.2 RT-A在体外血浆中的水解动力学
• 2.3.3 抑制剂对RT-A在血浆中稳定性的影响
• 2.4 小结
• 第三章 血浆样品中RT-B的HPLC方法的建立
• 3.1 实验材料
• 3.2 色谱条件
• 3.3 血浆样品的预处理方法
• 3.4 溶液的制备
• 3.5 方法确证
• 3.6 未知样品分析
• 3.7 讨论
• 第四章 RT-B与大鼠血浆蛋白结合率的研究
• 4.1 实验材料
• 4.2 RT-B定量分析方法的建立
• 4.2.1 色谱条件
• 4.2.2 透析液样品的预处理方法
• 4.2.3 溶液的制备
• 4.2.4 方法确证
• 4.3 RT-B与大鼠血浆蛋白结合率的研究
• 4.4 小结
• 第五章 结果与讨论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 个人简历