阿朴吗啡促进多巴胺能神经元存活的机理研究

论文摘要

帕金森病是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,由于真正引起黑质变性的原因并未完全被阐明,目前一时难以根治这一疾病。阿朴吗啡（Apomorphine,APO）是一种非选择性多巴胺受体（D1/D2受体）激动剂,它可以直接刺激纹状体突触后多巴胺受体,有效地缓解帕金森病病人的开关现象等症状,同时也被认为是一个有潜能的抗氧化剂,可以有效地控制过多的细胞凋亡率和减少过多的NO。本研究着重探索了多巴胺受体激动类药物新的作用机制??阿朴吗啡促进星形胶质细胞合成/分泌神经营养因子来保护黑质多巴胺能神经元。研究表明在APO的刺激下,星形胶质细胞中FGF-2蛋白表达水平显著增加,并呈现浓度依赖和时间依赖,S-APO处理则没有影响。APO刺激可将高分子量FGF-2蛋白从核转运至胞浆中,并促进四种形式FGF-2蛋白全部向胞外培养液中分泌。这种效应可以被多巴胺受体激动剂所模拟,也可以被多巴胺受体拮抗剂部分阻断。激动D1受体增加PKA的活性,而激动D2受体会使MAPK磷酸化。我们用RT-PCR和Western blot方法首次证明RGS2、RGS5存在于星形胶质细胞中。在APO刺激下,星形胶质细胞中RGS2 mRNA随即下降,至30分钟时几乎完全消失。RGS5 mRNA下降幅度更为明显,10分钟时完全消失,2小时后它们都逐渐恢复到基线水平。RGS2蛋白定位于细胞核、浆和膜。APO刺激后,RGS2蛋白定位于胞核中的细胞数目明显下降,而定位于胞膜上的细胞数目则上升了2倍。细胞中过表达RGS2,可以明显下调APO增加FGF-2蛋白表达的效应。此外,我们还发现一种特异性兴奋PI-linked多巴胺受体的化合物SKF83959,激活PLC-IP3-Ca2+下游信号转导通路,引起胞内Ca2+浓度明显上升,促进FGF-2蛋白合成和分泌,有效地保护TH阳性神经元的存活。SKF83959不能影响D1受体激动剂SKF38393引起的PKA磷酸化水平,也不影响cAMP/PKA和MEK/MAPK信号转导通路的活性。将APO的D环上10、11二羟基分别置换为CH3COO-和CH3O-产生新的化学衍生物Z-MF1和Z-MF2,均可促进FGF-2蛋白表达增加。

论文目录

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• 专有名词缩写
• 材料和方法
• 正文前言
• 第一章 阿朴吗啡通过激动星形胶质细胞多巴胺受体调控 FGF-2 蛋白表达水平,促进多巴胺能神经元的存活
• 1.1 引言
• 1.2 结果
• 1.2.1 APO 处理星形胶质细胞后的条件培养液中的FGF-2 蛋白可以促进TH 阳性神经元的存活
• 1.2.2 APO 处理星形胶质细胞后可以改变高分子量FGF-2 蛋白的亚细胞定位
• 1.2.3 多巴胺受体的激活是APO 调节FGF-2 蛋白生物合成的原因
• 1.2.4 APO 调节FGF-2 蛋白生物合成是通过cAMP 及PKC,而不是PI-3K
• 1.2.5 APO 通过D1/2 受体分别激活了cAMP/PKA 和MEK/MAPK 信号转导通路
• 1.2.6 在D1 受体被激活的情况下,cAMP/PKA 对 MEK/MAPK 信号转导通路有一定的抑制作用
• 1.3 讨论
• 1.3.1 药物处理可以增加FGF-2 蛋白的表达水平
• 1.3.2 APO 可以促进HMW-和LMW FGF-2 蛋白分泌至细胞外
• 1.3.3 对APO 调控FGF-2 蛋白表达水平上升来说,cAMP/PKA 和 MEK/MAPK 信号转导通路起着关键作用
• 1.4 参考文献
• 第二章 G 蛋白信号通路调节子（RG52）参与调控阿朴吗啡诱导FGF-2 蛋白在星形胶质细胞中的表达
• 2.1 引言
• 2.2 结果
• 2.2.1 不同脑区RGS 蛋白表达谱不同,星形胶质细胞中只表达RG52 和RG55
• 2.2.2 在APO 刺激下,星形胶质细胞中RG52 和RG55 表达水平迅速下降
• 2.2.3 在APO 刺激下,星形胶质细胞内RG52 蛋白定位发生改变
• 2.2.4 RG52 蛋白负性调控APO 促进星形胶质细胞中FGF-2 蛋白的生物合成
• 2.3 讨论
• 2.3.1 RG52 蛋白负性调控GPCR 介导的信号转导通路
• 2.3.2 帕金森病患者长期服用左旋多巴产生“耐药”现象
• 2.4 参考文献
• 第三章 新型多巴胺受体激动剂调节星形胶质细胞中FGF-2 蛋白
• 3.1 引言
• 3.2 结果
• 3.2.1 SKF83959 促进星形胶质细胞中FGF-2 蛋白生物合成和分泌,并可有效地保护TH 阳性神经元的存活
• 3/Ca²⁺下游信号转导通路,而不激活cAMP/PKA 和MEK/MAPK'>3.2.2 SKF83959 通过PI-linked 受体介导PLC/IP₃/Ca²⁺下游信号转导通路,而不激活cAMP/PKA 和MEK/MAPK
• 3/Ca²⁺信号转导通路促进星形胶质细胞内Ca²⁺浓度上升'>3.2.3 SKF83959 通过PLC/IP₃/Ca²⁺信号转导通路促进星形胶质细胞内Ca²⁺浓度上升
• 3.2.4 比较APO 及其衍生物对星形胶质细胞内FGF-2 蛋白生物合成的影响
• 3.3 讨论
• 3.3.1 SKF83959 是一种特异性激动PI-linked 受体的工具药物
• 3.3.2 设计研制新型抗帕金森病药物具有极大的发展潜力
• 3.4 参考文献
• 总结
• 专业综述
• 多巴胺受体介导细胞内信号转导通路的研究
• 在读博士期间发表文章目录
• 致谢