抗血管生成影响荷人骨肉瘤裸鼠肿瘤血管生成的形态学研究

论文题目: 抗血管生成影响荷人骨肉瘤裸鼠肿瘤血管生成的形态学研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 外科学

作者: 王家骐

导师: 蔡宣松,梅炯

关键词: 裸小鼠,血管内皮生长因子,腺病毒,干扰,抗血管生成

文献来源: 同济大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的：体内肿瘤生长依赖于促血管生成因子(angiogenic factors)诱导的血管生成(angiogenesis)。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是近年来发现的最强烈的内皮细胞分裂刺激素和血管生成诱导剂。VEGF在骨肉瘤血管生成发展中起着重要作用。本实验通过建立裸小鼠移植瘤模型，应用腺病毒介导VEGF-siRNA对人骨肉瘤抑制作用的体内研究，探讨封闭内源性VEGF的产生对骨肉瘤血管生成的影响，为进一步开展针对VEGF的肿瘤抗血管生成基因治疗积累资料。方法：应用鼠龄4-8wk，体重15～20g的Balb／c裸小鼠，雌雄兼半，于裸小鼠左侧季肋部皮下注射VEGF高表达的人骨肉瘤细胞系MG63，300万／只，建立裸小鼠皮下移植瘤模型。实验动物随机分为3组，A组：AD-VEGF-siRNA组，15只；B组：AD-EGFP组，15只；C组：PBS组，15只。接种肿瘤细胞后第8，10，12，14，16天肿瘤内用微量注射器多点注射各实验组药物，200ul／次，病毒总量2×10~6pfu。对裸小鼠皮下移植瘤模型治疗组和对照组进行为期19天的实验观察，在第一次注射药物后隔天测量1次裸小鼠肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。接种后第18天各组随机抽取2只裸小鼠行MRI检查观察骨肉瘤瘤体血流灌注情况。所剩6只裸小鼠在接种后第19天处死，取肿瘤标本，称重。各组取随机抽取1例标本的少量组织，经6％戊二醛磷酸缓冲液固定，再处理后，行透射电镜下仿血管发生超微结构观察。余下标本(包括已取出少量组织的标本)于10％福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋后行连续切片，行大体标本观察，常规HE染色，VEGF，CD31相关抗原免疫组化染色。结果：1．实验动物肿瘤大体形态，HE病理观察：3组实验动物约在接种后5天成瘤。AD-VEGF-siRNA治疗组皮下肿瘤瘤体较小，多呈半球形，部分小鼠有出血，溃疡灶。细胞数目较少，间隙大，肿瘤内毛细血管减少。AD-EGFP组和PBS组移植瘤瘤体较大，呈分叶状。细胞数目多，细胞排列紧密，间质稀少，肿瘤内毛细血管丰富。2．实验动物生长过程中瘤体体积，瘤重观察：AD-VEGF-siRNA治疗组动物从给药开始，肿瘤缓慢生长直到给药结束，第18天肿瘤瘤体体积为(0.3132±0.1793)cm~3，同期两对照组AD-EGFP组和PBS组分别为(1.2130±0.2904)cm~3和(1.4303±0.9475)cm~3，第19天肿瘤瘤重AD-VEGF-siRNA治疗组为(0.7473±0.2071)g，AD-EGFP组和PBS组分别为(1.1899±0.2741)g和(1.1861±0.3496)g。方差分析各组间体积，瘤重差异均具有显著性(P＜0.05)。3．各组CD31标记的微血管密度(MVD)计数：AD-VEGF-siRNA，AD-EGFP和PBS组阳性血管计数分别为5.79±0.34，10.59±1.06，10.98±0.45，方差分析各组间差别具有显著性(P＜0.05)。4．各组间VEGF表达情况：AD-VEGF-siRNA组阳性统计数为235228.09±123244.41，AD-EGFP组为964192.40±90479.62，PBS组为981298.00±213590.50。方差分析各组间差别具有显著性(P＜0.05)。5．肿瘤组织MVD和VEGF表达相关性分析：相关系数r为0.9989，p=0.0302，呈正相关。6．MRI观察骨肉瘤瘤体血流灌注情况：病毒组AD-VEGF-siRNA组下降幅值及最大斜率有小于PBS组的趋势，说明其局部灌注有小于PBS的趋势。7．仿血管发生的观察：AD-VEGF-siRNA组血管拟态计数分别为1.4000±0.5477，2.6000±0.5477，2.6000±0.8944，方差分析差异有显著性(P＜0.05)，两对照组间没有明显差异(P＞0.05)。8．透射电镜观察：骨肉瘤组织中可见由肿瘤细胞围成的管道样结构结论：1．AD-VEGF-siRNA对骨肉瘤生长在宏观和微观上起到了明显的抑制作2．免疫组化分析表明：AD-VEGF-siRNA抑制肿瘤细胞VEGF的表达，从而干扰肿瘤新生血管的生成。3．骨肉瘤中VEGF与微血管密度(MVD)成明显正相关。3．MRI灌注成像显示AD-VEGF-siRNA可以减少肿瘤内血流灌注，表明动态增强MRI在抗肿瘤血管生成形态学研究中的应用价值。4．动物实验的角度也证实骨肉瘤内存在仿血管发生现象，AD-VEGF-siRNA可能通过抑制肿瘤血供进而干扰仿血管发生。

论文目录:

摘要

Abstract

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 细胞系和病毒

2.1.2 实验动物

2.1.3 主要试剂

2.1.4 主要仪器和设备

2.2 方法

2.2.1 裸小鼠人骨肉瘤移植瘤模型的构建

2.2.2 实验分组

2.2.3 肿瘤生长指标测定和标本观察处理

2.2.4 HE染色

2.2.5 免疫组化Envision法检测肿瘤组织微血管密度(MVD)

2.2.6 免疫组化Envision法检测肿瘤组织VEGF表达

2.2.7 MRI观察骨肉瘤血流灌注情况

2.2.8 透射电镜观察

2.2.9 统计学分析

第3章 结果

3.1 裸小鼠成瘤性观察

3.2 肿瘤组织病理学检查

3.3 移植瘤在裸小鼠皮下的生长和体积和瘤重变化

3.4 MVD计数分析肿瘤血管生成

3.5 肿瘤组织VEGF表达分析

3.6 肿瘤组织MVD和VEGF表达的相关性分析

3.7 MRI观察骨肉瘤瘤体血流灌注情况

3.8 肿瘤组织仿血管发生的观察

3.9 透射电镜观察结构

第4章 讨论

4.1 VEGF在骨肉瘤新生血管生成中的作用

4.2 腺病毒介导VEGF-siRNA技术在体内运用价值探讨

4.3 肿瘤组织微血管密度价值

4.4 VEGF和MVD是骨肉瘤患者的预后的指标

4.5 动态增强MRI在肿瘤血管生成形态学研究中的价值

4.6 骨肉瘤中仿血管发生现象探讨

4.7 抗血管生成前景与展望

第5章 结论

致谢

参考文献

附录 文献综述

附录A 骨肉瘤化疗的现状和研究进展

附录B 骨肉瘤化疗研究研究新进展

个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果

发布时间: 2007-12-28

参考文献

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