微丝解聚因子在大鼠卵泡及黄体中的表达

论文摘要

微丝解聚因子家族(AC蛋白家族)是肌动蛋白结合蛋白,是微丝骨架的一个重要调节者。AC蛋白家族能够截断微丝,促进微丝解聚和肌动蛋白单体循环,调控微丝骨架的重建,进而影响与微丝骨架相关的一些生理功能如细胞增殖、细胞迁移、细胞凋亡及胚胎发育等。目前有关AC蛋白家族在哺乳动物卵巢中的表达和作用还没有报道。本文利用原位杂交、northern blot方法,检测cofilin1,cofilin2,destrin三个AC蛋白家族成员在大鼠卵泡发育、围排卵期、黄体形成和退化过程中的表达变化。在PMSG处理的大鼠卵泡发育过程中,原位杂交结果表明:cofilin1在未分化卵泡膜上有较强的阳性信号,在分化的有腔卵泡内膜上均检测cofilin1的较强的阳性信号。在PMSG/HCG诱导的黄体化(排卵前后)过程中,cofilin1在HCG处理后的0h, 4h的排卵前的有腔卵泡内膜上表达。接近排卵期的卵泡膜细胞和颗粒细胞上cofilin1信号达到峰值,排卵后黄素化的过程中cofilin1 mRNA维持较高的表达。在促性腺激素诱导的黄体形成和退化过程中,HCG处理后的第2天,刚刚形成的的黄体上检测到cofilin1强的阳性信号,处理后第4,8天信号减弱;第14天cofilin1信号增强,第18,22天有所减弱;Northern blot结果表明,HCG处理后第2天的cofilin1 mRNA的水平显著较高,随后第4,8天明显降低,第14天又升高,第18,22天有所减弱。cofilin1 mRNA在妊娠黄体模型中的表达与促性腺激素诱导的黄体形成和退化模型类似。原位杂交结果表明在妊娠第2天cofilin1的信号较强,在妊娠第4,8,13天较弱,第18,22天增强。Northern blot结果表明:在妊娠第2天cofilin1 mRNA的水平较高。第4,8,13降低,第18,22升高。以上结果表明:cofilin1mRNA定位在未分化的卵泡膜上和分化的卵泡内膜上,提示cofilin1可能与卵泡膜的生长分化及功能有关。在排卵前后的卵泡壁上强表达提示cofilin1可能在排卵及颗粒细胞黄素化过程中有作用。在黄体的形成和结构性退化中较强的表达,其可能参与黄体化过程及黄体的形成和退化。原位杂交结果表明:在PMSG处理的卵泡发育过程中,destrin mRNA在腔前卵泡膜上有微弱的阳性信号,在有腔卵泡的卵泡内膜上较强表达;PMSG/HCG诱导的黄体化(排卵前后)过程中,destrin mRNA的阳性信号逐渐由内膜向外扩展到卵泡外膜及膜层颗粒细胞,在排卵前的整个卵泡的膜细胞和壁层颗粒细胞上信号较强,排卵后的黄素化细胞上维持较高水平的表达。在促性腺激素诱导的黄体形成和退化模型中,在HCG处理后的第2天刚刚形成的黄体上观察到明显的destrin mRNA的阳性信号,在第4,8天明显减弱,第14,17,21天destrin的信号较强;Northern blot结果表明,HCG处理后的第2天destrin mRNA的水平最高,第4,8天显著降低,在第14天以后,水平逐渐升高。在妊娠黄体模型中,原位杂交检测结果表明:在妊娠第2天的黄体上有较强的destrin阳性信号,随后的第4,9,13明显减弱,第18,22信号增强;Northern blot结果表明在destrin mRNA在妊娠黄体中表达差异显著,在妊娠第2天destrin mRNA的水平最高,第4天降低,在第9,13天达到几乎检测不到的水平,第18,22天明显升高。以上结果表明, destrin定位在未分化的卵泡膜和分化的卵泡内膜上,提示destrin也可能与卵泡膜的发育及功能相关。在排卵前的卵泡壁及颗粒细胞上的大量表达推测其可能参与排卵过程及颗粒细胞黄素化过程。此外destrin在黄体的形成和退化期有较强表达,提示其可能参与黄体的形成和退化。在整个卵泡发育、排卵及黄体的形成和退化过程中,基本没有检测到cofilin2的明显表达。因此,cofilin1和destrin在未分化的卵泡膜及分化的卵泡内膜上特异性表达,提示其可能与卵泡膜的分化及功能相关;cofilin1和destrin在排卵前的卵泡壁及壁层颗粒细胞上高水平表达说明其可能在排卵过程中起到重要的作用,并且在排卵前后黄素化过程中持续较强的表达,提示它们参与黄体化过程。此外,它们在黄体形成和退化过程中的较强表达推测可能参与黄体形成和退化过程中有一定的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 卵泡的发育及其调控
• 1.1.1 转化生长因子家族（TGF）在卵泡发育中的作用
• 1.1.2 干细胞因子（SCF，KL）在卵泡发育过程中的作用
• 1.1.3 胰岛素样生长因子（IGF）在卵泡发育过程中的作用
• 1.1.4 碱性成纤维细胞生长因子在卵泡发育过程中的作用
• 1.2 排卵的机制及调控
• 1.2.1 排卵机制的研究进展
• 1.2.2 排卵的分子调控
• 1.3 黄体的发育及调控
• 1.3.1 黄体细胞的来源
• 1.3.2 黄体形成过程中的事件及调控
• 1.3.3 黄体退化过程中的事件及调控
• 1.4 AC 蛋白家族研究
• 1.4.1 AC 蛋白家族成员及在组织中的分布
• 1.4.2 AC 蛋白的活性调节
• 1.4.3 AC 蛋白与动物生殖
• 1.5 本研究的目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 大鼠卵巢的取材
• 2.2.1 促性腺激素诱导的卵泡发育
• 2.2.2 早期黄体化
• 2.2.3 黄体的形成和退化
• 2.2.4 妊娠黄体
• 2.3 原位杂交
• 2.3.1 RNA 探针的制备
• 2.3.2 冰冻切片制备
• 2.3.3 试剂及溶液
• 2.3.4 原位杂交流程
• 2.4 Northern blot
• 2.4.1 RNA 的提取
• 2.4.2 试剂及溶液
• 2.4.3 Northern blot 流程
• 3 结果
• 3.1 在PMSG 诱导大鼠卵泡发育过程中AC 蛋白家族mRNA 的表达
• 3.1.1 cfl1 mRNA 在PMSG 诱导的大鼠卵泡发育过程中的表达
• 3.1.2 Dstn mRNA 在PMSG 诱导的大鼠卵泡发育过程中的表达
• 3.1.3 cfl2 mRNA 在PMSG 诱导的大鼠卵泡发育过程中的表达
• 3.2 在PMSG-hCG 诱导的大鼠早期黄体化及排卵前后AC 蛋白家族m RNA 的表达
• 3.2.1 cfl1 mRNA 在PMSG
• 3.2.2 dstn m RNA 在PMSG
• 3.2.3 cfl2 mRNA 在PMSG
• 3.3 在PMSG-hCG 诱导的大鼠黄体形成和退化过程中AC 蛋白家族mRNA 的表达
• 3.3.1 cfl1 mRNA 在大鼠黄体形成和退化过程中表达
• 3.3.2 Dstn mRNA 在大鼠黄体形成和退化过程中表达
• 3.3.3 cfl2 mRNA 在大鼠黄体形成和退化过程中表达
• 3.4 在大鼠妊娠黄体中AC 蛋白家族mRNA 的表达
• 3.4.1 cfl1 mRNA 在大鼠妊娠黄体中的表达
• 3.4.2 Dstn mRNA 在大鼠妊娠黄体中的表达
• 4 讨论
• 4.1 AC 蛋白家族与卵泡膜的发育
• 4.2 AC 蛋白家族与排卵
• 4.3 AC 蛋白家族与大鼠黄体化
• 4.4 AC 蛋白家族与黄体退化
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士学位期间发表的论文