刺参Apostichopus japonicus (Selenka)白化特征发生机理的基础研究

论文摘要

本研究以不同发育阶段的白刺参和青刺参为研究材料,利用生物学、组织学、分子生物学方法,对白刺参和青刺参进行比较研究。从生物学、组织学和分子生物学角度,综合探讨了刺参白化特征的发生机理。1.白刺参体壁的基本营养成分（水分、灰分、粗蛋白、总脂肪、总糖）较青刺参无差异。青刺参成体体壁中黑色素含量约为白刺参的16倍,青刺参成体体壁中黑色素含量为干重的3.12%,而白刺参成体体壁中黑色素含量仅为干重的0.24%。在受精后第25、32、39、46、53天的稚参中,青刺参的黑色素含量较白刺参无显著差异。在受精后第60、74、81、88天的稚参中,青刺参的黑色素含量均显著高于白刺参。可见,刺参体壁黑色素的缺乏是导致刺参白化发生的直接原因。2.刺参成体体壁由角质层（cuticle）、表皮层（epidermis）和内皮层（dermis）构成。相对于青刺参,白刺参成体体壁的黑色素细胞明显较少;白刺参成体体壁黑色素细胞中黑色素体的密度明显较小,且部分黑色素体为未有黑色素沉积的黑色素前体（pre-melanosome）。刺参稚参体壁已形成清晰的角质层（cuticle）,表皮层（epidermis）和内皮层（dermis）结构。相对于青刺参,白刺参稚参体壁仅存在极少的黑色素细胞。白刺参稚参体壁黑色素细胞中黑色素体的发育程度极低,几乎不存在发育成熟的黑色素体,大多黑色素体为未有黑色素沉积的黑色素前体（pre-melanosome）。可见,黑色素细胞的缺乏及黑色素体中黑色素沉积的缺乏是刺参白化发生的组织学特征。3.克隆了刺参MITF基因cDNA全长序列,此目的基因序列符合bHLHZip转录因子家族的特征。白刺参成体体壁中MITF基因的表达量显著低于青刺参,青刺参成体体壁中该基因的表达量是白刺参的2.96±0.15倍。在受精后第25天的稚参中,白刺参和青刺参中MITF基因的表达量无显著差异。在受精后第32、39、46、53、60、74、81、88天的稚参中,白刺参中MITF基因的表达量均显著低于青刺参。可见,MITF参与刺参黑色素细胞的发育、分化和功能调节,MITF基因的低表达是刺参白化发生的原因之一。4.克隆了刺参astacin基因cDNA全长序列,此目的基因序列符合astacin家族的特征。白刺参成体体壁中astacin基因的表达量显著低于青刺参,青刺参成体体壁中该基因的表达量是白刺参的2.73±0.08倍。在受精后第25、32天的稚参中,白刺参和青刺参中astacin基因的表达量无显著差异。在受精后第39、46、53、60、74、81、88天的稚参中,白刺参中astacin基因的表达量均显著低于青刺参。可见,astacin基因参与刺参体色的调控,astacin基因的低表达与刺参白化的发生具有一定相关性。

论文目录

• 前言
• 摘要
• Abstract
• 第一章 动物白化机理研究进展
• 1.1 动物白化发生机理研究进展
• 1.1.1 黑色素沉积的缺乏是动物白化的表征现象
• 1.1.2 白化现象发生机理的研究已进入基因水平
• 1.2 本研究的目的、意义及研究思路
• 1.2.1 研究目的意义
• 1.2.2 研究思路
• 1.2.3 可能的创新性
• 1.3 本章小结
• 第二章 白刺参与青刺参体壁基本营养成分及黑色素含量的比较
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 白刺参与青刺参成体体壁基本营养成分的比较
• 2.3.2 不同发育阶段白刺参与青刺参体壁黑色素含量的比较
• 2.4 讨论
• 2.4.1 白刺参与青刺参成体体壁基本营养成分的差异
• 2.4.2 不同发育阶段白刺参与青刺参体壁黑色素含量的差异
• 2.5 本章小结
• 第三章 白刺参与青刺参体壁组织学及超微结构的比较
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 白刺参与青刺参成体体壁组织学的比较
• 3.3.2 白刺参与青刺参成体体壁黑色素细胞超微结构的比较
• 3.3.3 白刺参与青刺参稚参体壁组织学的比较
• 3.3.4 白刺参与青刺参稚参体壁黑色素细胞超微结构的比较
• 3.4 讨论
• 3.4.1 白刺参与青刺参成体体壁组织学及超微结构的差异
• 3.4.2 白刺参与青刺参稚参体壁组织学及超微结构的差异
• 3.5 本章小结
• 第四章 刺参小眼畸形相关转录因子基因的克隆、表达及与白化相关性的分析
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 刺参MITF 基因全长cDNA 克隆与分析
• 4.3.2 白刺参与青刺参成体MITF 基因表达的比较
• 4.3.3 白刺参与青刺参稚参MITF 基因表达的比较
• 4.4 讨论
• 4.4.1 刺参MITF 基因序列特征
• 4.4.2 刺参MITF 基因与白化特征发生的相关性
• 4.5 本章小结
• 第五章 刺参astacin基因的克隆、表达及与白化相关性的分析
• 5.1 前言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 实验方法
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 刺参astacin 基因全长cDNA 克隆与分析
• 5.3.2 白刺参与青刺参成体astacin 基因表达的比较
• 5.3.3 白刺参与青刺参稚参astacin 基因表达的比较
• 5.4 讨论
• 5.4.1 刺参astacin 基因序列特征
• 5.4.2 刺参astacin 基因与白化特征发生的相关性
• 5.5 本章小结
• 第六章 总结与展望
• 6.1 研究总结
• 6.2 存在的问题
• 6.3 研究展望
• 参考文献
• 博士期间撰写及发表文章情况
• 致谢