情志因素对去卵巢大鼠脑神经递质、内分泌的影响及中药的干预作用

论文摘要

目的更年期是妇女由生育期向老年阶段的过渡时期,其间卵巢功能从旺盛状态逐渐衰退,卵巢分泌的雌激素水平波动或下降,导致下丘脑-垂体-性腺轴协调功能改变,部分妇女在此期间不能适应这种变化,出现以植物神经系统功能紊乱为主,伴有神经心理症状的一组症候群以及低雌激素水平的相关疾病,即更年期综合征。本实验以去卵巢模型大鼠为研究对象,探讨去卵巢大鼠的神经内分泌变化及情志因素对其的影响。中医认为,更年期综合征病机以肾虚为本,故本实验亦探讨了左归丸的干预作用。方法2月龄雌性SD大鼠48只,体重180－220g,按体重区组随机分为6组：假手术组、去卵巢空白组、去卵巢恐模型组、左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组,每组8只。去卵巢空白组、去卵巢恐模型组、左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组行双侧卵巢摘除术,假手术组以相同手术方法打开腹腔后缝合。从术后第9天起,去卵巢恐模型组、左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组每日接受一次“猫吓鼠”情志刺激,共21日。各组大鼠均从术后第9天起开始接受灌胃给药,假手术组、去卵巢空白组、去卵巢恐模型组按9.45ml/kg给予蒸馏水灌胃,每日1次；左归丸组按9.45ml/kg给予左归丸中药混悬液（含生药1g/ml）灌胃,每日1次；阿普唑仑组按9.45ml/kg给予阿普唑伦蒸馏水溶液（浓度为0.0076mg/ml）灌胃,每日1次；倍美力组按9.45ml/kg给予倍美力蒸馏水溶液（浓度为5.952μg/ml）灌胃,每日1次,各组均连续给药21日。各组大鼠于末次给药后2小时,进行高架T迷宫实验和旷场实验。末次给药后24小时,大鼠被断头处死,取材后采用化学发光法检测大鼠血清性激素水平；高效液相色谱电化学法检测大鼠脑组织5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸、去甲肾上腺素含量；免疫组化法观察大鼠脑组织雌激素受体的表达。结果1各组大鼠行为学测试结果：旷场实验：水平得分方面,去卵巢空白组与假手术组相比明显减少（P<0.05）；去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比无显著差异（P>0.05）。垂直得分方面,去卵巢空白组与假手术组相比明显减少（P<0.05）；去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比明显减少（P<0.05）；左归丸组、阿普唑仑组、倍美力组与去卵巢恐模型组相比,旷场实验水平得分无明显差异（P>0.05）；三组的旷场实验垂直得分均高于去卵巢恐模型组（P<0.05）；左归丸组与阿普唑仑组、左归丸组与倍美力组相比,垂直得分较高（P<0.05）。高架T迷宫实验：去卵巢空白组与假手术组的单向逃跑时间无显著差异（P<0.05）；去卵巢恐模型组的单向逃跑时间低于去卵巢空白组（P<0.05）；左归丸组、倍美力组与去卵巢恐模型组相比,均高于去卵巢恐模型组（P<0.05）；左归丸组与假手术组相比无明显差异（P>0.05）；左归丸组与阿普唑仑组、左归丸组与倍美力组相比,左归丸组单向逃跑时间均较高（P<0.05）。2各组大鼠血清E2含量结果：去卵巢空白组E2水平与假手术组相比明显减少（P<0.05）；去卵巢恐模型组E2水平与去卵巢空白组相比无明显差异（P>0.05）；左归丸组、倍美力组与去卵巢恐模型组相比,E2水平高于去卵巢恐模型组（P<0.05）；左归丸组、倍美力组与假手术组相比无明显差异（P>0.05）；左归丸组与倍美力组相比无明显差异（P>0.05）。3各组大鼠脑神经递质含量结果海马神经递质含量结果：去卵巢空白组与假手术组相比,去卵巢空白组大鼠海马5-HT、NE含量明显增加（P<0.05）,5-HIAA含量无明显变化（P>0.05）,而去卵巢恐模型组与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠海马5-HT、NE含量明显增加（P<0.05）,5-HIAA含量无明显变化（P>0.05）；去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比,5-HT、NE含量有所下降（P<0.05）；与假手术组相比,去卵巢空白组及去卵巢恐模型组大鼠海马5-HT与NE含量比值有显著差别,5-HT/NE比值升高（P<0.05）。左归丸组与去卵巢恐模型组相比,左归丸组大鼠海马5-HT、NE明显低于去卵巢恐模型组（P<0.05）,5-HIAA含量无明显变化（P>0.05）,左归丸组与假手术组相比,两组大鼠海马5-HT、NE含量无明显差异（P>0.05）；左归丸组与倍美力组相比,两组大鼠海马5-HT含量无明显差别（P>0.05）,但左归丸组大鼠海马NE明显低于倍美力组（P<0.05）,接近假手术组水平；左归丸组与假手术组相比,5-HT/NE比值无明显差异（P>0.05）。额叶皮质神经递质含量结果：去卵巢恐模型组与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠皮质5-HT、NE含量明显增加（P<0.05）,5-HIAA含量明显降低（P<0.05）；与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠皮质5-HT/NE升高（P<0.05）。左归丸组与去卵巢恐模型组相比,左归丸组大鼠皮质5-HT明显低于去卵巢恐模型组（P<0.05）,5-HIAA含量明显增加（P<0.05）；左归丸组与假手术组相比,两组大鼠皮质5-HT含量无明显差异（P>0.05）,而5-HIAA含量明显升高（P<0.05）；去卵巢恐模型组与假手术组相比,NE含量明显增加（P<0.05）,而左归丸组与假手术组皮质NE含量无明显差别（P>0.05）；左归丸组与假手术组相比,5-HT/NE比值无明显差异（P>0.05）。4各组大鼠海马ERβ积分光密度结果：去卵巢空白组与假手术组相比,去卵巢空白组大鼠海马ERβ积分光密度明显高于假手术组大鼠（P<0.05）；去卵巢恐模型组与去卵巢空白组相比,去卵巢恐模型组大鼠海马ERβ积分光密度明显高于去卵巢空白组大鼠（P<0.05）；去卵巢恐模型组与假手术组相比,去卵巢恐模型组大鼠海马ERβ积分光密度明显高于假手术组大鼠（P<0.05）；左归丸组与去卵巢恐模型组相比,左归丸组大鼠海马ERβ积分光密度明显低于去卵巢恐模型组（P<0.05）；左归丸组与假手术组相比,两组大鼠海马ERβ积分光密度无明显差异（P>0.05）；倍美力组与去卵巢恐模型组相比,海马ERβ积分光密度明显低于去卵巢恐模型组（P<0.05）；倍美力组与假手术组相比,两组大鼠海马ERβ积分光密度无明显差异（P>0.05）；左归丸组与倍美力组相比,两组大鼠海马ERβ积分光密度无明显差异（P>0.005）。结论1在行为学实验中,去卵巢后大鼠旷场实验水平得分、垂直得分减少,活动度及探究能力降低,而情志刺激可进一步降低大鼠探究能力；高架T迷宫实验中,去卵巢加情志刺激可缩短平均单向逃跑时间,升高大鼠惊恐水平,而左归丸可提高去卵巢恐模型组大鼠垂直得分及单向逃跑时间,增强其探究能力,降低其惊恐水平,并达到假手术组水平。2去卵巢后大鼠血清E：明显下降,情志刺激对去卵巢大鼠血清E2的进一步影响不大。左归丸可明显提高去卵巢恐模型大鼠血清E2,使血清E2达到假手术组水平。3去卵巢及情志刺激使大鼠海马单胺类神经递质5-HT、NE明显增加,5-HIAA含量无明显变化,5-HT/NE升高,5-HT含量的增加可能来自去卵巢及情志刺激造模对5-HT合成的增强作用。中药左归丸的干预可使升高的海马5-HT、NE含量下调至接近假手术组水平,使5-HT和NE的比例恢复到平衡,其中5-HT含量的下调,可能是通过抑制5-HT的合成路径的一个或多个环节达到的。去卵巢及情志刺激使大鼠额叶皮质单胺类神经递质5-HT、NE明显增加,5-HIAA含量明显降低,5-HT/NE升高,5-HT降解减慢或伴有合成的增加。中药左归丸的干预可使升高的额叶皮质5-HT、NE含量下调至接近假手术组水平,使5-HT和NE的比例恢复到平衡,其中5-HT含量的下调,可能是通过加快5-HT的降解速度实现的。4大鼠去除卵巢后海马ERβ的表达上调,其机制可能是雌激素缺乏后引起的代偿性增高。情志刺激会进一步增加大鼠海马ERβ的表达,有可能是由应激对神经-内分泌-免疫网络系统的作用影响实现的。左归丸干预后,可使升高的ERβ表达下降,并使其达到假手术组水平,这可能与左归丸使体内雌激素的水平升高有关,同时也可能与左归丸对神经内分泌的整体调节有关。本实验通过建立情志因素（恐）影响下的更年期雌性大鼠模型,观察到其行为学、内分泌、神经递质及雌激素受体方面的改变,初步提示更年期综合征发病机制涉及到多环节、多系统。中药左归丸可降低行为学实验中大鼠的惊恐水平,并对生殖内分泌、神经递质等方面的异常变化具有改善作用,从而使失调的机体内环境回归稳定,体现了中药复方多成分、多层次、多靶点的整体复合效应,也为临床运用补肾药物防治更年期综合征提供了理论和实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 研究背景
• 1 情志的概念
• 2 情志致病源流
• 3 中医对肾与恐的认识
• 4 恐伤肾的病理改变
• 5 恐惧动物模型的建立
• 6 动物模型行为学评价
• 7 中医对更年期综合征的认识
• 7.1 病名
• 7.2 病机
• 7.3 治疗现状
• 第一章 情志因素（恐）对去卵巢大鼠行为学评估及比较
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验装置及仪器
• 1.3 药物
• 2 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 模型制作方法
• 2.3 药物制备方法
• 2.4 给药剂量
• 2.5 给药方法及疗程
• 2.6 大鼠的行为学测试
• 2.7 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 各组大鼠旷场实验行为学比较结果
• 3.2 各组大鼠T迷宫实验行为学比较结果
• 2的影响'>第二章 情志因素（恐）对去卵巢大鼠血清E₂的影响
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验装置及仪器
• 1.3 药物
• 1.4 试剂
• 2 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 模型制作方法
• 2.3 药物制备方法
• 2.4 给药剂量
• 2.5 给药方法及疗程
• 2.6 标本的采集与处理方法
• 2.7 指标测定方法
• 2.8 统计学处理
• 3 结果
• 2含量比较结果'>3.1 各组大鼠血清E₂含量比较结果
• 第三章 情志因素（恐）对去卵巢大鼠脑神经递质的影响
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验装置及仪器
• 1.3 药物
• 1.4 试剂
• 2 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 模型制作方法
• 2.3 药物制备方法
• 2.4 给药剂量
• 2.5 给药方法及疗程
• 2.6 组织样本制备
• 2.7 高效液相-电化学法测定方法
• 2.8 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 系统适应性试验结果
• 3.2 线性关系考察结果
• 3.3 单胺类神经递质含量比较结果
• 第四章 情志因素（恐）对去卵巢大鼠脑雌激素受体的影响
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验装置及仪器
• 1.3 药物
• 1.4 试剂
• 2 方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 模型制作方法
• 2.3 药物制备方法
• 2.4 给药剂量
• 2.5 给药方法及疗程
• 2.6 组织样本制备
• 2.7 免疫组化操作规程
• 3 结果
• 3.1 各组大鼠海马ERβ积分光密度比较结果
• 讨论
• 1 模型的选择
• 2 组方依据
• 3 阳性对照药选择
• 4 情志因素（恐）对去卵巢大鼠行为学的影响
• 5 情志因素（恐）对去卵巢大鼠性激素的影响
• 6 情志因素（恐）对去卵巢大鼠脑神经递质的影响
• 6.1 神经递质分类
• 6.2 神经递质功能
• 6.3 雌激素与神经递质
• 6.4 应激与情志
• 6.5 海马和额叶皮质
• 7 情志因素（恐）对去卵巢大鼠脑组织雌激素受体的影响
• 7.1 雌激素与雌激素受体
• 7.2 雌激素受体与应激
• 全文小结
• 参考文献
• 研究生在学期间发表论文情况
• 致谢