论文摘要
【目的】观察骨膜细胞经成骨因子BMP7诱导后的细胞生物学特征,鉴定骨膜细胞经BMP7体外诱导分化为成骨细胞的基因表达和细胞功能。【方法】取材于成人胫骨骨膜,常规体外培养。实验分为实验组和对照组,分别加入BMP7加成骨辅助剂和单纯成骨辅助剂进行培养。CCK-8法检测细胞增殖活性,第5天、第10天、第15天和第20天分别采用RealTime-PCR检测骨钙素基因表达,ELISA法检测上清液ALP、骨钙素及骨桥蛋白的水平,甲苯胺蓝染色检测糖胺聚糖及RealTime-PCR检测Ⅱ型胶原基因,比色法检测细胞ALP活性,ALP染色法检测ALP、Von Kossa染色法检测钙结节。【结果】1、两组骨钙素基因表达及上清液ALP、骨钙素、骨桥蛋白的含量均增高,实验组与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。2、两组细胞的ALP和钙结节染色阳性率增高,实验组与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。3.、甲苯胺蓝染色阳性率及Ⅱ型胶原基因表达表现为先高后低,实验组与对照组差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】1、骨膜细胞在BMP7诱导下体外大量增殖、分化成骨,经过基因和细胞功能检测证实其具有明显的成骨特异基因表达,并具有合成、分泌成骨特异蛋白的功能。2、BMP7体外诱导骨膜细胞成骨分化过程中,除直接分化成骨外,还存在部分细胞先经软骨细胞形成再钙化成骨的现象。3、经骨膜细胞-BMP7途径在体外可获取大量具备典型生物学特征的成骨细胞,并可用于组织工程的体外构骨及临床应用。