胶质细胞源性神经营养因子受体Ret与Rap1GAP相互作用及其功能的研究

论文摘要

胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）家族包括GDNF、NRTN（neurturin）、ARTN（artemin）、PSPN（persephin）四个成员。它们不仅可以支持中枢神经系统内中脑多巴胺能神经元与运动神经元等多种神经元的存活和发育,还支持许多外周神经元如交感、副交感、感觉与肠道神经元等的存活并调节其分化。除神经系统外,GDNF还是肾脏发育中的重要的形态形成因子,并在精原细胞分化过程中起关键的调节作用。GDNF家族成员通过其相应受体介导信号转导引起一系列细胞效应,即在GFRα1-4的帮助下与受体Ret结合,促进Ret二聚化和自磷酸化,继而由Ret进一步结合和激活下游信号分子,发生一系列信号级联反应,最终激活Ras/MAPK、PI3-K以及PLCγ等信号转导通路。Ret受体属于受体酪氨酸激酶（RTK, Receptor Tyrosine Kinase）家族成员,是一种跨膜糖蛋白,含胞外域、跨膜段和胞内域三个部分。其中胞内域含酪氨酸激酶活性区和重要的酪氨酸结合位点,如Y1062可以至少和5种入坞蛋白结合:Shc、FRS2、DOK4/5、IRS1/2和enigma,从而激活MAPK或PI-3K等途径,促进神经元存活及轴突生长或分支。 Rap1GAP是1991年发现的第一个对于小G蛋白Rap1具有GTP酶激活活性的蛋白,大小89KDa。小G蛋白Rap1属于Ras亚家族,和Ras有53%的同源性,是和Ras最相近的成员。特异的鸟核苷酸交换因子（GEFs）促进小G蛋白与GDP解离,使其结合GTP而激活小G蛋白;而特异的GTP酶激活蛋白（GAPs）则可加速小G蛋白水解结合在其上的GTP,从而使其活性抑制。Rap1GAP作为GAPs的一种,可水解Rap1结合的GTP使Rap1失活。Rap1GAP蛋白的核心区340个氨基酸（75—415）足以发挥GTPase的水解活性,这个区域和其他小G蛋白的GAP没有任何同源性。以往对Rap1GAP的研究主要和参与肿瘤抑制有关。最近的文献表明,Rap1GAP在神经元的树突生长过程和导致树突棘头部增大的进程中具有重要的调节作用。人们还发现,在PC12细胞中的GαZ一旦激活后,内源性Rap1GAP可结合GαZ并将其从胞浆募集到膜上,最终抑制NGF引起的PC12细胞分化。 我们在前期研究中,用Ret胞内域为诱饵经酵母双杂交筛选人脑cDNA文库,

论文目录

• Ⅰ 英文缩写表
• Ⅱ 中文摘要
• Abstract
• Ⅲ 前言
• Ⅳ 材料与方法
• Ⅴ 结果
• IC体外结合'>一、酵母双杂交实验确定Rap1GAP与Ret^IC体外结合
• 二、Ret与Rap1GAP在大鼠脑、脊髓组织裂解液中存在相互结合
• 三、Ret与Rap1GAP在大鼠脊髓组织神经元、体外培养的中脑神经元中均存在共定位
• 四、GDNF刺激对Ret和Rap1GAP结合的影响
• Ⅵ 讨论
• Ⅶ 结论
• Ⅷ 参考文献
• Ⅸ 综述
• Ⅹ 致谢