利用噬菌体展示技术筛选抗Aβ聚集的短肽

论文摘要

背景:随着人口寿命的延长和出生率的逐年降低,我国老龄化问题日趋严重。老龄人群的高痴呆患病率已成为一个严峻的社会问题。阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease,AD）是导致老年人痴呆的最常见原因。目前被批准用于临床治疗AD的药物寥寥无几,仅有乙酰胆碱酯酶抑制剂如多奈哌齐和N-甲基-D-天冬氨酸盐受体拮抗剂如美金刚,但这些药物不能根本性逆转AD病情,其治疗仍处在对症水平。目前较普遍认同的假设是脑内Aβ负荷增大是AD病理过程的启动因子。因此,抗Aβ相互聚集形成寡聚体、纤丝和老年斑的物质将可能最终成为逆转AD患者病情的药物。所以,研发抗Aβ相互聚集的药物是未来的发展方向。目的:以Aβ分子上包含影响Aβ分子相互聚集片段的Aβ1-10为靶分子,利用噬菌体肽库展示技术筛选出与该特殊片段能特异性结合的短肽,在体外观察其特异性结合Aβ、抑制Aβ自发形成纤丝的能力。方法:合成包含有EFRH序列的Aβ1-10,并将其部分生物素化。以生物素化的Aβ1-10为靶分子,用噬菌体展示技术及液相亲和捕获法筛选出特异性高亲和力噬菌体。应用BIAcore3000仪器检测所筛得的噬菌体与靶分子之间的亲和动力学关系;透射电镜下观察特异性噬菌体能否阻止Aβ分子相互聚集形成斑块;对特异性噬菌体随机挑取单克隆,PCR扩增后送测序公司测序;根据测序结果合成相应的短肽,作进一步的功能研究。结果:经过对靶分子的三轮筛选,筛出了与Aβ1-10特异结合的单克隆噬菌体;生物传感分析技术结果进一步表明靶分子(AB1-10)与所筛选噬菌体之间的结合具有高度特异性;透射电镜下可观察到特异性噬菌体能阻止Aβ分子相互聚集形成斑块;成功地对特异性噬菌体进行了测序并合成了相应的短肽。结论:经过三轮的筛选,筛选出了展示特异性高亲和力结合Aβ1-10短肽的噬菌体。该噬菌体所携带的特异性高亲和力短肽能够在体外阻止Aβ分子相互聚集形成斑块。

论文目录

• 中英文缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 研究工作的不足与进一步设想
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 综述参考文献