论文摘要
目的: （1）探讨金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）及金属蛋白酶（MMPs）非肽类抑制剂AG3340（普马司他,prinomastat）对IL-1 β处理的胰岛细胞的胰岛素分泌功能的影响,筛选有效的胰岛细胞功能保护剂。 （2）构建及鉴定载入金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的重组腺相关病毒载体（rAAV-TIMP-1）及慢病毒载体（LV-TIMP-1）。 方法: （1）采用胰管内胶原酶灌注和Histopaque 1077密度离心法分离纯化胰岛,分别与TIMP-1、AG3340共培养1h,再加入IL-1 β继续培养24h,进行葡萄糖刺激胰岛素释放试验,用ELISA方法检测培养液中胰岛素含量变化。 （2）利用基因重组方法构建含TIMP-1全基因序列的重组腺相关病毒质粒（pAAV-TIMP-1）、然后与辅助质粒共转染HEK293细胞,装配成rAAV-TIMP-1,用对照病毒rAAV-hrGFP转导HT1080细胞测定重组病毒滴度,Western blot检测重组病毒的功能。 （3）应用基因重组方法构建含TIMP-1全基因序列的慢病毒质粒（pLenti6/V5-TIMP-1）,与辅助质粒共转染包装细胞,G418筛选阳性克隆,装配成LV-TIMP-1,利用对照重组病毒LV-hrGFP转导RIN5F细胞测定病毒的滴度,通过Western blot检测LV-TIMP-1在293FT细
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