论文摘要
目的：miRNA在基因调控中起着关键作用,同样线粒体转录因子A （TFAM）是线粒体DNA的复制和转录过程中的必要因素。但是两者之间的关系及其在膀胱癌中的作用并不明确。本研究旨在阐明miR-590-3p和TFAM对膀胱癌的作用并探讨其分子机制。方法：1、采用Real-time PCR检测miR590-3p和West-Blot检测TFAM在正常组织、癌旁组织及不同分期的膀胱癌组织中的表达情况。2、采用双荧光素酶报告基因系统验证miR-590-3p与TFAM之间的调控关系。3、构建miR-590-3p过表达慢病毒载体和TFAM过表达质粒载体4、采用MTT法、流式细胞检测法、TransWell法等常用方法对慢病毒感染和质粒转染的人膀胱癌细胞进行实验,从细胞生长、细胞周期、侵袭能力、克隆形成的方面来检测miR-590-3p靶向调控TFAM对膀胱癌生物学行为的影响。5、用Western-Blot方法来检测转染了miR-590-3p过表达慢病毒和TFAM过表达质粒的膀胱癌5637细胞中PI3K/、p-PI3K、AKT、 p-AKT、MMP-2、MMP-9等因子的表达情况,来初步探寻其两者的调控信号通道。结果：1、miR-590-3p在膀胱癌组织中表达较对照组减弱（P<0.05）,且随病理分期的增加而减弱；与之相反的是TFAM在膀胱癌组织中表达增强（P<0.05）,且随病理分期的增加而增强。2、共转染TFAM3’-UTR-psi-CHECK2野生重组质粒和miR590-3P mimics的细胞样本中,双荧光素酶活性强度相比对照组显著下调；但在共转染TFAM mut-3’-UTR-psi-CHECK2突变重组质粒和miR590-3P mimics的细胞样本中,双荧光素酶活性强度与对照组无差异。这说明miR-590-3p能负性靶向调控TFAM.3、miR-590-3p过表达压低了膀胱癌细胞的生长曲线,使细胞周期阻滞在G2期,克隆形成能力减低,侵袭力减弱；而与之相反,TFAM过表达抬高了膀胱癌细胞的生长曲线,延长了S期,增强了克隆形成能力和侵袭力。4、与对照组比较而言,上调niR-590-3p表达能抑制PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP-2、MMP-9的表达,而上调TFAM表达却促进PI3K, p-PI3K、AKT、p-AKT、MMP-2、MMP-9的表达。结论：miR-590-3p能负性调控TFAM起到对膀胱癌抑制的作用,这种调控是通过抑制PI3K/AKT信号通路的活性而使MMP-2和MMP-9表达下调来实现的。
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