肾上腺皮质增生与腺瘤差异表达基因的筛选和研究

论文摘要

背景与目的：原醛症是继发性高血压的常见原因之一，最近应用血浆醛固酮浓度与肾素的比例作为在高血压病人群中检出原醛症的筛查试验中表明，在亚洲高血压病人群中原醛症的发病率至少为5％-13％；同样的方法发现在欧洲高血压病人群中原醛症的发病率可到5％-25％。肾上腺皮质增生和腺瘤是原醛症最常见的两种亚型。肾上腺皮质腺瘤患者手术能治愈，而皮质增生需要以药物治疗为主结合手术且复发率较高。因此，鉴别肾上腺皮质增生和腺瘤对于临床工作有重要的意义。但是这两种病变的临床表现都是高血压、高醛固酮血症，低血钾，当前我们只能靠一些实验室的生化指标、影像学及术后标本的病理结果对两种疾病进行鉴别。我们发现在病理上两种病变存在很大差异，因此可以认为两种病变的发生必然和不同基因的表达相关联。随着基础实验方法的飞速发展，特别是人类基因组计划的全面完成，利用基因芯片技术寻找差异表达基因已经成为分子生物学的研究热点之一。该技术具有高灵敏度、高特异性、及结果可靠、可重复性良好等特点，因此利用基因芯片技术能迅速有效的分离、克隆肾上腺皮质增生和腺瘤组织之间的差异表达基因，这些基因对于了解疾病发生、发展分子生物学机制以及两种疾病在临床中诊断、鉴别诊断、治疗等方面都有十分重要的意义，特别是在药物及手术治疗都不能有效控制肾上腺皮质增生病变的问题上开辟新的治疗途径，从而能有效的较少该病变的复发。方法：首先制备包含22k个基因的寡核苷酸基因芯片，分别提取肾上腺皮质增生和腺瘤及正常肾上腺组织的总RNA，然后将总RNA采用直接荧光标记法逆转录成Cy5或Cy3标记的cDNA，肾上腺皮质增生和腺瘤及正常肾上腺组织的cDNA分别与基因芯片杂交，杂交后的芯片经过处理后ScanArray Express双通道激光扫描仪进行扫描，得到杂交图像，采用GenePix Pro 4.0图像分析软件对芯片图像进行分析，把图像信号转化为数字信号，得出杂交信号数据，对数据用Lowess方法进行归一化，最后以Radio≥2或≤0.5的标准来确定差异表达基因。本实验在设计中是应用同一正常肾上腺组织与两种病变分别比较，因此可以认为两种病变之间也仍有可比性，能应用相同的方法筛选出肾上腺皮质增生和腺瘤之间的差异表达基因。结果：在本实验中，肾上腺皮质腺瘤与正常肾上腺相比较共筛选出个333个差异表达基因，其中118个基因表达上调，215个基因表达下调；肾上腺皮质增生病变与正常肾上腺比较中共筛选出133个差异表达基因，其中49个基因表达上调，84个基因表达下调。通过计算机数据分析及文献检索，我们筛查出来部分肾上腺皮质增生和腺瘤之间的差异表达基因，这些基因按照功能分类包括了抑癌基因、生长因子、细胞因子、受体等多种类型，这些基因在两种病变的发生、发展中的作用机制有待进一步研究。结论：1．原发性醛固酮增多症中肾上腺皮质增生和腺瘤相比存在较大的差异，通过以上方法能有效地筛选出原发性醛固酮增多症中肾上腺皮质增生和腺瘤的差异表达基因。2．对筛选出的差异表达基因进行计算机数据分析及文献检索，确定其身份及功能，例如：（1）STAR、CYP11B、MCR2等基因在调节醛固酮的生成和分泌中发挥重要的作用；（2）KDR基因的表达与肿瘤内部血管的生长密切相关，而且通过免疫组化等方法对KDR基因的研究可能有助于在组织学上进一步区别肾上腺皮质增生和腺瘤。这些基因在原发性醛固酮增多症中肾上腺皮质增生和腺瘤两种亚型的发生、发展的作用机制及进一步在疾病的诊断、鉴别诊断、治疗及预后分析的应用上都有重要的意义。3．本研究所发现的差异表达基因片段为国内首次构建原发性醛固酮增多症基因文库，对于深入研究原发性醛固酮增多症及其肾上腺皮质增生和腺瘤两种亚型提供了丰富的基础科研资料。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 符号说明
• 技术策略
• 论文正文 肾上腺皮质增生与腺瘤差异表达基因的筛选和研究
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢