论文摘要
目的 互隔交链孢霉是从食管癌高发区林县粮食中分离出的一株污染菌,而互隔交链孢酚（alternariol,AOH）是从中分离的一种毒素,可能引发细胞癌变,以往的研究表明它与食管癌的发病有一定关系。 DNA聚合酶β（DNA polymerase β,pol β）是人体内主要的碱基切除修复聚合酶。近年来发现,它在组织的异常表达与人类肿瘤发生有一定的关系,尤其是在食管癌组织内发现存在有pol β基因的突变,且突变形式与其他肿瘤有很多不同之处,因而,它的生物学功能越来越受到人们的关注并成为研究食管癌的发病机理的新视点。 本研究的目的在于观察互隔交链孢酚对NIH3T3细胞中DNA聚合酶β基因突变的影响,探讨互隔交链孢酚致癌可能的机制,并为进一步研究pol β的生物学功能和特性研究提供实验依据。 材料方法 将本研究室冻存的NIH3T3细胞复苏后培养,待其生长情况良好,用含有不同浓度的互隔交链孢酚（AOH）的培养液作用于NIH3T3细胞,分为五组:①正常细胞组;②AOH浓度为2μmol/L组;③AOH浓度为4μmol/L组;④AOH浓度为8μmol/L组;⑤AOH浓度为16μmol/L组。首先提取细胞的总RNA,用RT-PCR方法从细胞总RNA中扩增出DNA聚合酶β基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆至pGEM-T easy载体后,选用JM109菌株,用氯化钙法制备感受态细菌,将目的基因转入宿主细菌内,蓝白筛选、通用引物扩增鉴定后,送上海生物工程公司进行测序,用DNASIS、OMIGA软件分析序列变化,与GenBank中DNA
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