论文摘要
目的 从M-CSF高表达HL60细胞的ds cDNA中寻找和鉴定M-CSF新的靶分子。 方法 PCR扩增M-CSF的胞外活性区,连接到MATCHMAKER GALA双杂交系统3的BD载体pGBKT7质粒,得“诱饵”—pGBKT7-M-CSE,再将pGBKT7-M-CSF质粒转化酵母菌AH109或CG1945,建立AH109-pGBKT7-M-CSF或CG1945-pGBKT7-M-CSF融合菌。提取HL60细胞的总RNA,逆转录成ds cDNA,即双杂交筛选M-CSF相互作用蛋白的“猎物”。将HL60细胞的ds cDNA转化AH109-pGBKT7-M-CSF或CG1945-pGBKT7-M-CSF融合菌,根据报告基因的激活有否,筛选出相互作用蛋白的阳性克隆（AD-Y）,验证分离单克隆后,抽提质粒,DNA测序,通过生物信息学技术分析测序获得的DNA序列。 结果 应用酵母双杂交技术,以M-CSF为诱饵,以酵母菌株AH109/CG1945为宿主菌,从HL60细胞的ds cDNA中,分别筛选到3个和7个候选阳性克隆,经DNA测序与BLAST分析发现有3个克隆的插入子为已知的基因,分别为酸性核糖体蛋白PO、CD81和MCM3,其余的插入子是未知的基因序列。 结论 成功构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-M-CSF与充当酵母双杂交系统cDNA文库的HL60细胞的ds cDNA。筛选获得3个与M-CSF相互作用的靶分子（酸性核糖体蛋白PO、CD81和MCM3）;其余7个为未知的新基因序列。
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