秀丽隐杆线虫Ⅱ型糖尿病模型的建立及在中药复方筛选中的应用

论文摘要

本文利用秀丽隐杆线虫daf-2突变体建立Ⅱ型糖尿病（T2DM）模型,控制培养条件,该突变体线虫在有利条件下也会进入休眠态,呈dauer表型,此dauer表型即为秀丽隐杆线虫的T2DM模型。本文首先对建立模型的实验条件进行了优化,结果表明建立秀丽隐杆线虫T2DM模型的最优条件为：经同步化处理后孵化48h的L1期秀丽隐杆线虫50条／孔,食物E. coli OP50的终浓度为0.05%（w/v）,每孔总体积为200μL,25℃培养。采用Na3VO4和二甲双胍作为阳性药物对该模型进行治疗验证。Na3VO4对DR1564的T2DM模型有显著的治疗作用,其中,绕道效果达到了20.4%；当培养温度设定为22℃和25℃时,该模型在22℃下具有更高的灵敏度；给药方式对模型的灵敏度也有影响,绕道治疗比营救治疗具有更高的灵敏度。由于二甲双胍与Na3VO4的作用机制不同,二甲双胍对DR1564的T2DM模型没有治疗作用。这一结果提示该模型适用于筛选作用于胰岛素受体下游的化合物。对于CB1370的T2DM模型,二甲双胍和Na3VO4都没有治疗作用,这与CB1370的daf-2基因是强突变有关。鉴于中药治疗糖尿病的独特优势及中药作用机制的复杂性,本文选择部分人服用后有效果的治疗T2DM的4个中药处方对秀丽隐杆线虫的T2DM模型进行治疗,以探讨用此模型筛选中药的可行性。结果：A方C/16、D方C/256是四个方子中营救效果最显著的,它们的营救效果都达到了28%,添加Na3VO4或二甲双胍于其中反而不利于它们发挥应有的营救作用。A方C/16和Na3V04联合作用、D方C/32和Na3VO4联合作用的比它们单独作用更有利于秀丽隐杆线虫绕道,联合作用后绕道效果分别达到了40%和45%。以上结果表明秀丽隐杆线虫的T2DM模型也可用来筛选中药处方。最后本文用己建立的秀丽隐杆线虫T2DM模型进行了TTC高通量筛选方法研究,目的在于应用该模型来经济高效地筛选中药处方,从而摆脱采用显微镜目视检测的传统筛选方法。结果表明秀丽隐杆线虫T2DM模型的TTC高通量筛选方法最优条件为：TTC的终浓度为3%、E. coli OP50的终浓度为0.0625%、39。C染色120min。另外,非成虫条数对比色值无影响。高通量筛选药物时孔内秀丽隐杆线虫条数不低于200条。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 引言
• 1.抗Ⅱ型糖尿病药物的评价和筛选方法
• 2.秀丽隐杆线虫简介
• 3.秀丽隐杆线虫在药物筛选中的应用
• 4 秀丽隐杆线虫在抗Ⅱ型糖尿病药物筛选中的应用
• 5.课题的提出
• 第二部分 秀丽隐杆线虫Ⅱ型糖尿病模型的建立
• 1.材料
• 1.1 菌种
• 1.2 秀丽隐杆线虫
• 1.3 培养基
• 1.4 仪器
• 2.方法
• 2.1 秀丽隐杆线虫的培养
• 2.2 秀丽隐杆线虫的同步化
• 2.3 秀丽隐杆线虫最适食物量的选择
• 2.4 T2DM模型的建立
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 第三部分 秀丽隐杆线虫Ⅱ型糖尿病模型的治疗
• 1.材料
• 1.1 菌种
• 1.2 秀丽隐杆线虫
• 1.3 药物
• 2.方法
• 2.1 DMSO对秀丽隐杆线虫的影响
• 2.2 秀丽隐杆线虫Ⅱ型糖尿病模型的治疗
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 第四部分 秀丽隐杆线虫Ⅱ型糖尿病模型的中药复方治疗研究
• 1.材料
• 1.1 菌种
• 1.2 秀丽隐杆线虫
• 1.3 药物
• 1.4 中药处方
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 第五部分 秀丽隐杆线虫T2DM模型药物筛选的高通量研究
• 1.材料
• 1.1 菌种
• 1.2 秀丽隐杆线虫
• 1.3 药品
• 2.方法
• 2.1 最佳染色温度的确定
• 2.2 最佳TTC浓度的确定
• 2.3 最佳E.coli OP50浓度的确定
• 2.4 染色时间的确定
• 2.5 非成虫条数对比色值的影响
• 2.6 成虫数目对比色值的影响
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 第六部分 结论
• 参考文献
• 致谢