甲磺司特对哮喘大鼠气道炎症及IL-5的影响

论文摘要

目的在大鼠哮喘模型上观察甲磺司特（Suplatast Tosilate,IPD）干预前后哮喘大鼠气道炎症、肺组织白细胞介素5（Interleukin-5,IL-5）基因表达以及肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluids,BALF）中IL-5的含量的变化,探讨甲磺司特在哮喘防治中的可能作用机制。方法1.取雄性成年SD大鼠（4周龄,体重200±20g）50只,分为五组:对照（Control）组、模型（Model）组、布地奈德（budesonide,BUD）组、IPD早期干预组即IPD（A）组和IPD晚期干预组即IPD（B）组,各组10只。2.在实验0天（即致敏前）尾静脉采血测定外周血嗜酸性粒细胞（eosinophil,,EOS）总数与百分比。除Control组以外的其余四组大鼠分别于第1天和第8天腹腔注射10﹪OVA混合液1ml（含OVA 100mg、氢氧化铝100mg及灭活百日咳杆菌苗5×109个作为免疫佐剂）致敏。2周后再进行激发,2﹪OVA泵雾化吸入,10分钟/次,每天1次,连续7天,构建大鼠哮喘模型,Control组致敏和激发均以生理盐水代替。BUD组每次激发前BUD泵雾化吸入,IPD（A）组和IPD（B）组分别从致敏和激发阶段开始予IPD（50mg/kg.d）灌胃。3.末次激发24小时内麻醉动物,再次尾静脉采血测定外周血EOS总数与百分比,气管插管后行气道高反应性（airway hyper responsiveness,AHR）检测;检测后立即腹主动脉放血处死大鼠,取各组动物BALF及肺组织,分别测定BALF中炎性细胞总数和EOS百分比、通过逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测肺组织IL-5mRNA的表达、酶联免疫吸附试验法（Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）测定BALF上清液中IL-5的含量,并分析IL-5与EOS、AHR之间的相关性,结合肺组织病理学检查分析气道炎症状态。结果1.大鼠哮喘模型的建立:与Control组相比,在激发过程中,Model组大鼠逐渐出现烦躁不安、挠鼻、呼吸急促、点头状呼吸、发绀、活动进食减少或俯卧不动、出现竖毛、毛发失去光泽甚至脱毛、反应迟滞等哮喘样表现。激发7天后,Model组大鼠动物气道高反应性测定显示气道反应性增高,与Control组比较差异有统计学意义（P<0.05）;肺组织病理显示:气道周围明显炎症改变、支气管管壁增厚、管腔狭窄,气道上皮细胞脱落,粘液分泌明显增加。BALF细胞学显示EOS百分比明显增加（P<0.05）,提示哮喘大鼠模型复制成功。2.气道高反应性测定:各组大鼠用盐酸组胺激发,在同一激发浓度,Model组、BUD组、IPD（A）组和IPD（B）组气道阻力明显高于Control组（P<0.05） ,差异有统计学意义;与Model组相比,BUD组、IPD（A）组和IPD（B）组气道阻力明显降低（P<0.05）,差异有统计学意义。而IPD（A）组与BUD组之间相比差异无统计学意义（P>0.05）。3.病理组织学检查:Model组气道周围炎症改变明显、支气管管壁增厚、管腔狭窄,气道上皮细胞脱落,粘液分泌明显增加。与Model组比较,IPD（A）组、IPD （B）和BUD组气道周围炎症明显减轻,气道周围炎症细胞浸润、气道分泌物减少、支气管壁增厚及上皮细胞脱落现象明显改善。4. BALF细胞学检测:IPD（A）组、IPD（B）组和BUD组炎性细胞总数及EOS百分比明显低于Model组（P<0.05）;IPD（A）组与BUD组之间炎性细胞总数及EOS百分比则差异无统计学意义（P>0.05）。5.外周血EOS总数与百分比:实验前（即致敏前）:5组大鼠外周血EOS的总数与百分比无明显差异（P>0.05）。实验后（即激发7天后）:IPD（A）组、IPD（B）组和BUD组外周血EOS总数与百分比明显低于Model组（P<0.05）;IPD（A）组、IPD（B）组和BUD组外周血EOS总数与百分比三组之间差异无统计学意义（P>0.05）。6. BALF上清液中IL-5含量:致敏、激发后Model组BALF上清液中IL-5的含量较Control组明显升高（P<0.05）;IPD（A）组、IPD （B）组和BUD组IL-5含量明显低于Model组（P<0.05）;IPD（A）组和BUD组之间相比差异无统计学意义（P>0.05）。7.肺组织IL-5mRNA表达量:致敏、激发后Model组肺组织中IL-5mRNA的表达较Control组明显升高（P<0.05）;IPD（A）组、IPD （B组）和BUD组IL-5mRNA表达量明显低于Model组（P<0.05）, IPD（A）组和BUD组之间相比差异无统计学意义（P>0.05）。8. BALF中IL-5含量与气道阻力成正相关（r=0.919,P<0.01）;肺组织IL-5mRNA的表达量与气道阻力成正相关（r=0.909,P<0.01）;BALF中IL-5含量与EOS百分比成正相关（r=0.955,P<0.01）;BALF中EOS百分比与气道阻力成正相关（r=0.865, P<0.01）;BALF中IL-5含量与BALF中炎性细胞总数成正相关（r=0.955,P<0.01）;肺组织IL-5mRNA的表达量与BALF中IL-5的含量成正相关（r=0.973,P<0.01）。结论1. IPD能够降低哮喘大鼠气道高反应性,部分抑制气道炎症、抑制EOS的募集。2. IPD能抑制肺组织IL-5的基因转录,降低BALF中IL-5的含量。3. IPD早期干预作用与BUD有相似的抗炎效应。IPD晚期干预也有部分抗炎作用。.4. IPD降低气道高反应性、抑制气道炎症可能是通过降低IL-5的合成实现的,并且在基因转录水平产生影响。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果