本文主要研究内容
作者贾丽娜,彭效祥,李明萱,罗淑萍,张云芳,赵荣兰（2019）在《P2X7受体胞外段蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定》一文中研究指出：目的:克隆嘌呤能离子通道型受体7（P2X7R）胞外段编码序列,体外表达和鉴定重组P2X7R胞外段蛋白。方法:采用德泰生物密码子优化软件MaxCodonTMOptimization Program （V13）,对P2X7R胞外段蛋白氨基酸编码序列进行优化并设计PCR扩增引物。采用重叠PCR扩增目标基因,通过限制性酶切位点NdeⅠ和HindⅢ,将P2X7R胞外段编码序列定向插入原核表达载体pET30a（+）,构建pET30a-P2X7R重组表达质粒,转化至大肠埃希菌（E.coli）BL21（DE3+）表达菌种中,进行融合表达,诱导剂异丙基-β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达。重组蛋白含6×His纯化标签,亲和层析（Ni-IDA树脂）纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot鉴定纯化产物。结果:PCR扩增的P2X7R胞外段蛋白编码序列长度为885 bp,成功构建重组pET30a-P2X7R质粒,并转化至E.coli BL21（DE3+）菌株中。融合型表达的重组蛋白分子量约为34 kD,可被抗His标签单克隆抗体特异性识别。结论:成功克隆P2X7R胞外段蛋白编码序列、诱导表达并纯化了重组P2X7R胞外段蛋白,为今后制备抗人P2X7R胞外段蛋白的单克隆抗体奠定了坚实的基础。
Abstract
mu de :ke long piao ling neng li zi tong dao xing shou ti 7（P2X7R）bao wai duan bian ma xu lie ,ti wai biao da he jian ding chong zu P2X7Rbao wai duan dan bai 。fang fa :cai yong de tai sheng wu mi ma zi you hua ruan jian MaxCodonTMOptimization Program （V13）,dui P2X7Rbao wai duan dan bai an ji suan bian ma xu lie jin hang you hua bing she ji PCRkuo zeng yin wu 。cai yong chong die PCRkuo zeng mu biao ji yin ,tong guo xian zhi xing mei qie wei dian NdeⅠhe HindⅢ,jiang P2X7Rbao wai duan bian ma xu lie ding xiang cha ru yuan he biao da zai ti pET30a（+）,gou jian pET30a-P2X7Rchong zu biao da zhi li ,zhuai hua zhi da chang ai xi jun （E.coli）BL21（DE3+）biao da jun chong zhong ,jin hang rong ge biao da ,you dao ji yi bing ji -β-Dliu dai ban ru tang gan （IPTG）you dao chong zu dan bai biao da 。chong zu dan bai han 6×Hischun hua biao qian ,qin he ceng xi （Ni-IDAshu zhi ）chun hua hou ,SDS-PAGEning jiao dian yong he Western blotjian ding chun hua chan wu 。jie guo :PCRkuo zeng de P2X7Rbao wai duan dan bai bian ma xu lie chang du wei 885 bp,cheng gong gou jian chong zu pET30a-P2X7Rzhi li ,bing zhuai hua zhi E.coli BL21（DE3+）jun zhu zhong 。rong ge xing biao da de chong zu dan bai fen zi liang yao wei 34 kD,ke bei kang Hisbiao qian chan ke long kang ti te yi xing shi bie 。jie lun :cheng gong ke long P2X7Rbao wai duan dan bai bian ma xu lie 、you dao biao da bing chun hua le chong zu P2X7Rbao wai duan dan bai ,wei jin hou zhi bei kang ren P2X7Rbao wai duan dan bai de chan ke long kang ti dian ding le jian shi de ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国免疫学杂志的贾丽娜,彭效祥,李明萱,罗淑萍,张云芳,赵荣兰，发表于刊物中国免疫学杂志2019年19期论文，是一篇关于重组蛋白论文,克隆论文,融合表达论文,中国免疫学杂志2019年19期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国免疫学杂志2019年19期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：重组蛋白论文; 克隆论文; 融合表达论文; 中国免疫学杂志2019年19期论文;