论文题目: 转基因棉籽培养料栽培平菇过程中Bt蛋白、转入DNA降解及对平菇、平菇害虫的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 农业昆虫与害虫防治
作者: 徐宝梁
导师: 张青文
关键词: 转基因棉籽,平菇栽培,生物安全
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究利用转基因棉籽成分配制培养基培养平菇,了解平菇培养过程中Bt蛋白和DNA的降解情况,了解转基因棉籽成分对平菇生长的影响,了解转基因棉籽成分对平菇酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的影响,探索转基因棉籽成分对平菇细胞内DNA的影响,探索转基因棉籽成分对平菇主要害虫的影响,从而探索转基因棉籽在平菇栽培生态系统中的安全问题。 1、利用Envirologix试剂盒和Agdia试剂盒,测得转CryIA(c)基因棉花品种新棉99B和DP33B棉籽、棉籽仁经过一年的贮存后,Bt蛋白的含量降低一半左右;棉籽壳经过一年的贮存后,Bt蛋白的含量下降四分之一左右。 2、用棉籽配制培养料栽培平菇,利用Agdia试剂盒测定培养料中Bt蛋白的吸光值。含3%棉籽的培养料,接种平菇35天后,检测不到Bt蛋白的净吸光值;含20%棉籽的培养料,接种平菇45天后,检测不到Bt蛋白净吸光值。 3、利用巢式PCR,对培养料中来自农杆菌终止子Nos的Nos180片段进行检测。含3%棉籽的培养料中,Nos180片段残留时间可达160天;含20%和30%棉籽的培养料中,Nos180片段残留时间可达190天。 4、在培养液中过滤加入Bt蛋白、棉籽成分提取液,培养平菇菌丝体。加入的Bt蛋白、棉籽成分提取液增加,菌丝湿重增加。不同品种转基因棉籽对平菇菌丝体生长的影响,有正面的,也有负面的。不同品种平菇在含转CryIA(c)基因棉花品种中30及其亲本棉品种中16棉籽成分提取液的培养液中,有的生长特性有差异。含有转基因棉籽、非转基因棉籽的培养料,不影响菌丝长势、菌丝满袋时间和菇蕾开始形成时间。 5、利用不同含量、不同品种棉籽配制的培养料栽培的平菇子实体,3%棉籽含量时同工酶酶谱没有差异,20%、30%棉籽含量时同工酶酶谱则出现差异。利用不同棉籽成分提取液配制的培养液培养的平菇菌丝体,有的同工酶酶谱存在差异。利用中16、中30棉籽成分提取液配制的培养液培养的不同品种平菇菌丝体,有的同工酶酶谱存在差异。含转基因棉籽及亲本棉棉籽成分的培养基培养的平菇子实体和菌丝体,棉籽成分含量高时其同工酶酶谱存在差异。 6、利用PCR方法,在平菇菌种中检测到了和花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子序列一致的35S165、35S195、35S205片段,而检测不到35S101、35S162、35S273片段;有的检测到了和农杆菌终止子Nos序列一致的Nos180核酸片段,但检测不到Nos165片段;利用转基因棉籽成分提取液配制的培养液培养的平菇(5.511和美国平菇)菌丝体,利用转基因棉籽配制的培养料栽培的平菇(P40)子实体中,均没有检测到外源Nos165、Nos180核酸片段。 7、DNA马铃薯葡萄糖培养液(DPD)、中16棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖培养液(C16PD)、中30棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖培养液(C30PD)中连续传代9代的菌丝体,DNA马铃薯葡萄糖琼脂(DPDA)、中16棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖琼脂(C16PDA)、中30棉籽成分提取液马铃薯葡萄糖琼脂(C30PDA)上连续传代10代的菌丝体,转基因棉籽和非转基因棉籽配制的培养料上栽培的平菇子实体,利用200条随机引物进行RAPD分析,没有发现稳定的差异。 8、利用中30棉籽及其亲本中16棉籽配制的菌棒,在菇棚中自然感虫,观察平菇厉眼菌蚊的发
论文目录:
摘要
Abstract
第一章 前言
1．1 转基因棉花及其生态安全问题
1．2 Bt蛋白的测定及在土壤中的降解
1．3 DNA片段的检测及在土壤中的降解
1．4 转Bt基因植物对土壤微生物的影响
1．5 转 Bt基因植物对非标靶节肢动物的直接影响
1．5．1 益虫
1．5．2 天敌
1．5．3 其他昆虫
1．5．4 食用菌害虫
1．6 转基因植物对真核生物细胞内DNA的影响
1．7 本研究的目的意义与技术路线
1．7．1 目的意义
1．7．2 技术路线
第二章 转 Bt基因棉棉籽组织中Bt蛋白测定及降解
2．1 材料与方法
2．1．1 棉籽
2．1．2 主要试剂
2．1．3 主要仪器
2．1．4 棉籽、棉籽仁、棉籽壳贮存
2．1．5 提取液与稀释液制备
2．1．6 Bt蛋白测定
2．2 结果与分析
2．2．1 Envirologix试剂盒测定棉籽仁中Bt蛋白含量
2．2．2 Envirologix试剂盒和 Agdia试剂盒测得的净吸光值的线性关系
2．2．3 Agdia试剂盒测得的净吸光值与Bt蛋白浓度的线性关系
2．2．4 棉籽、棉籽仁、棉籽壳贮存过程中Bt蛋白的变化
2．3 讨论
第三章 培养料中棉籽量和转Bt基因棉棉籽对平菇生长的影响
3．1 材料与方法
3．1．1 平菇菌种
3．1．2 棉籽
3．1．3 平菇栽培
3．2 结果与分析
3．2．1 培养料中棉籽含量对平菇菌丝生长的影响
3．2．2 培养料中棉籽含量对平菇子实体形成的影响
3．2．3 转基因棉籽对平菇菌丝体生长的影响
3．3 讨论
第四章 转基因棉籽成分对培养液中平菇菌丝体生长的影响
4．1 材料与方法
4．1．1 平菇菌种
4．1．2 棉籽
4．1．3 主要试剂
4．1．4 主要仪器
4．1．5 Bt蛋白培养液培养菌丝体
4．1．6 棉籽成分培养液培养菌丝体
4．1．7 数据统计分析
4．2 结果与分析
4．2．1 Bt蛋白对平菇菌丝体生长的影响
4．2．2 棉籽成分含量对平菇菌丝体生长的影响
4．2．3 不同棉籽品种对平菇菌丝体生长的影响
4．2．4 中16、中30棉籽成分对不同品种平菇菌丝体的影响
4．3 讨论
第五章 转 Bt基因棉棉籽培养平菇过程中Bt蛋白的降解
5．1 材料与方法
5．1．1 平菇菌种
5．1．2 棉籽
5．1．3 主要试剂
5．1．4 主要仪器
5．1．5 平菇栽培与取样
5．1．6 菌丝体培养与取样
5．1．7 Bt蛋白测定
5．2 结果
5．2．1 含3%33B 棉籽的培养料中Bt蛋白的降解
5．2．2 含3%99B 棉籽的培养料中Bt蛋白的降解
5．2．3 含20%33B 棉籽的培养料中Bt蛋白的降解
5．2．4 含20%99B 棉籽的培养料中Bt蛋白的降解
5．2．5 培养液中Bt蛋白的降解
5．3 讨论
第六章 转 Bt基因棉棉籽培养平菇过程中有关 DNA的降解
6．1 材料与方法
6．1．1 平菇菌种
6．1．2 棉籽
6．1．3 主要试剂
6．1．4 主要仪器
6．1．5 平菇栽培与取样
6．1．6 核酸培养液培养的菌丝体
6．1．7 利用Promega 试剂盒提取 DNA
6．1．8 nest-PCR
6．2 结果与分析
6．3 讨论
第七章 转基因棉籽对平菇酷酶同功酶和过氧化物酶同工酶的影响
7．1 材料与方法
7．1．1 平菇菌种
7．1．2 棉籽
7．1．3 主要试剂及配制
7．1．4 主要仪器
7．1．5 平菇栽培
7．1．6 菌丝体培养
7．1．7 蛋白质粗提液的制备
7．1．8 同工酶电泳与染色
7．2 结果与分析
7．2．1 平菇子实体同工酶电泳
7．2．2 平菇菌丝体同工酶电泳
7．2．3 不同品种平菇菌丝体同工酶电泳
7．3 讨论
第八章 平菇组织中和有关外源基因同源的DNA片段的发现及来源探索
8．1 材料与方法
8．1．1 平菇菌种
8．1．2 棉籽
8．1．3 主要试剂
8．1．4 主要仪器
8．1．5 子实体培养与取样
8．1．6 菌丝体培养与取样
8．1．7 样品制备
8．1．8 PCR检测与测序
8．2 结果与分析
8．2．1 不含棉籽成分的培养液培养的平菇菌丝体
8．2．2 含非转基因棉籽的培养料栽培的平菇子实体
8．2．3 含转基因棉籽成分的培养液培养的平菇菌丝体
8．2．4 含转基因棉籽的培养料栽培的平菇子实体
8．2．5 测序结果
8．3 讨论
第九章 转 Bt基因棉棉籽成分培养的平菇子实体与菌丝体 DNA多态性分析
9．1 材料与方法
9．1．1 平菇菌种
9．1．2 棉籽
9．1．3 主要试剂
9．1．4 主要仪器
9．1．5 子实体培养
9．1．6 菌丝体培养
9．1．7 样品制备
9．1．8 RAPD方法
9．2 结果与分析
9．2．1 含 Bt棉棉籽的培养料栽培的平菇子实体
9．2．2 斜面上连续传代(10代)的平菇菌丝体
9．2．3 培养液中连续转代(9代)的平菇菌丝体
9．3 讨论
第十章 含转基因棉籽的培养料对3种平菇害虫的影响
10．1 材料与方法
10．1．1 平菇菌种
10．1．2 棉籽
10．1．3 培养料配制
10．1．4 菇棚感虫与虫量调查
10．1．5 含不同品种棉籽的培养料饲养平菇厉眼菌蚊与死亡率调查
10．1．6 数据统计分析
10．2 结果分析
10．2．1 对平菇厉眼菌蚊、粪蚊和蚤蝇发生量的影响
10．2．2 对平菇厉眼菌蚊死亡率的影响
10．3 讨论
第十一章 结论
参考文献
致谢
作者简介
发布时间: 2005-07-18
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